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Techniques想快速区分不同胰蛋白酶？这三点是关键！

📂 细胞培养 Type ID 5006

👁 13,648 views 🗓 2026-10-12 Source ID：3456

胰蛋白酶大致可以分为两种，一种是传统使用的动物源性的胰蛋白酶，普遍发现于脊椎动物消化系统，直接提取自牛或猪的胰腺组织；另一种则是非动物源性胰蛋白酶，即利用基因重组技术生产的重组胰蛋白酶。

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/3456 ↗

应用区别

胰蛋白酶

理化性质

胰蛋白酶是从牛、猪、羊的胰脏提取，通过多重结晶方式纯化，并进一步采取层析及超滤技术制备而得。该酶易溶于水，不溶于三氯甲烷、乙醇、乙醚等有机溶剂。在pH1.8时，酶短时间煮沸几乎不失活，在碱溶液中加热则会变性沉淀。Ca²⁺对酶有保护和激活作用，胰蛋白酶的等电点为pH10.1。胰蛋白酶作为肽链内切酶，对精氨酸和赖氨酸肽链具有选择性水解作用。早期的胰蛋白酶在生物制药领域的主要应用是胰岛素的生产，很快也在其他细胞培养领域应用起来。动物胰酶普遍用于血清培养，不同细胞加入的酶浓度不一样。

应用范围

胰岛素、灭活疫苗生产
组织细胞分离及培养
临床外科使用
食品行业加工助剂

重组胰蛋白酶

理化性质

重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶，具有稳定性好、纯度高、无动物来源的优点。市场主流的重组胰蛋白酶是利用DNA重组技术在大肠杆菌或酵母中表达的重组猪胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪胰蛋白酶完全一致，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。其由223个氨基酸构成，含有6对二硫键。该酶包含两种胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF和TLCK等、金属离子螯合剂如EDTA等的抑制。重组胰酶用于无血清培养，同胰蛋白酶一样，不同细胞加入的酶浓度不一样。

应用范围

疫苗和重组胰岛素生产
细胞分析的组织样本制备
免疫细胞治疗
生物药物生产
蛋白质序列、结构及组学研究

质量要求区别

分类	胰蛋白酶	重组胰蛋白酶	重组胰蛋白酶（质谱级）
来源	取自牛、猪、羊的胰脏	大肠杆菌或酵母重组表达	毕赤酵母重组表达
安全性	潜在病原污染	无外源性病毒污染	无外源性病毒污染
纯度	1：250胰蛋白酶溶液中90%以上为杂质	高纯度（β-trypsin≥70%， α-trypsin≤20%）	高纯度（β-trypsin>80%， α-trypsin<20%）
糜蛋白酶限量	每2500单位胰蛋白酶中不得多于50单位的糜蛋白酶。	无糜蛋白酶等杂酶污染	无糜蛋白酶等杂酶污染
比活	/	≥3800 USP units/mg 蛋白	>6800 USP units/mg蛋白
消化效果	不稳定	消化能力强，酶用量少	消化能力强，酶用量少
自切率	容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果	容易自切产生自身自切片段影响质谱分析结果	经过特殊处理保证其不自切

同时，药典级别的重组胰蛋白酶要求微生物的菌落总数不超过100cfu/mL，宿主蛋白质残留量不超过0.01%，外源性DNA残留量不超过10ng/mg。由上表可以看出，相比传统动物源提取的胰蛋白酶，重组胰蛋白酶在活性、纯度以及无动物源性等方面优势更为明显，更符合生物制药行业发展趋势。在国家政策层面上，2019年9月国家药监局发布的《疫苗上市后生产工艺变更研究技术指导原则》 (征求意见稿) 指出，在疫苗生产过程中，鼓励企业进行无动物源原辅料的变更，应尽可能避免使用人源或动物源性原材料。2020年版《中国药典》增加了重组胰蛋白酶标准，推动我国非动物源性生物药物的研发，因此重组胰蛋白酶已逐渐成为更高标准、更高要求的生物制药首选。翌圣生物在重组胰蛋白酶领域不断创新，不仅推出满足2020版中国药典要求的重组胰蛋白酶，最新推出的重组胰蛋白酶（质谱级）活性更高，优于进口同类产品，其中β-Trypsin的HPLC含量可达80%以上（高于2020版中国药典标准≥70%），储存稳定性高，蛋白质组学酶解漏切率比进口产品低50%。

细胞分离及基因表达水平区别

Maarof Manira^[1]等人研究了不同胰酶对皮肤细胞培养的影响。在这项研究中，全层人皮肤经过胶原酶消化后释放成纤维细胞，分别使用胰蛋白酶EDTA溶液（TE）和重组胰蛋白酶溶液（TS）处理细胞，发现在细胞的培养扩增过程中，用TE或TS处理的人角质形成细胞和成纤维细胞的总细胞产量相当（见图1）；通过定量RT- PCR和免疫细胞化学方法（ICC）分析TE和TS对I型胶原（Col-I）、III型胶原（Col-III）、细胞角蛋白10（CK10）和细胞角蛋白14（CK14）的基因和蛋白表达水平影响，发现与TE相比，TS除Col-III外的皮肤特异性基因表达更高，蛋白表达水平相似（见图2,4）。研究数据反馈，重组胰蛋白酶（TS）表现出更温和的消化效果，能够保持高细胞活力和细胞产量。

产品列表

产品名称	货号	规格
PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），无酚红	40123ES60	100 mL
PerfCell™ Trypsin-no EDTA (0.25%), no phenol red 胰酶-无EDTA溶液（0.25%），无酚红	40124ES60	100 mL
PerfCell™ Trypsin (0.25%), phenol red 胰酶溶液（0.25%），含酚红	40126ES60	100 mL
PerfCell™ Trypsin-EDTA (0.25%), Phenol red 胰酶-EDTA溶液（0.25%），含酚红	40127ES60	100 mL
Trypsin 1:250(powder) 胰蛋白酶1:250(粉末)	40101ES25	25 g
PerfCell™ Recombinant Trypsin（powder）重组胰蛋白酶（粉末）	40512ES10/60	10 mg/100 mg
Recombinant Trypsin（MS-SAFE）重组胰蛋白酶（质谱级）	20416ES60	100 µg
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，含酚红	40134ES60	100 mL
PerfCell Tryzyme™Express 酶 (1X)，无酚红	40135ES60	100 mL

参考文献：

[1]Manira M, Khairul Anuar K, Seet WT, Ahmad Irfan AW, Ng MH, Chua KH, Mohd Heikal MY, Aminuddin BS, Ruszymah BH. Comparison of the effects between animal-derived trypsin and recombinant trypsin on human skin cells proliferation, gene and protein expression. Cell Tissue Bank. 2014 Mar;15(1):41-9.

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Source: Yeasen Biotech

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