Techniques胰蛋白酶（胰酶）有哪几种？重组还是非重组？胰蛋白酶如何选择？

胰蛋白酶大致可以分为两种，一种是重组胰蛋白酶，一种是非重组的胰蛋白酶。

非重组胰蛋白酶（又称胰酶）是从牛、羊、猪的胰脏中所提取的一种丝氨酸蛋白水解酶，能特异性切割带正电荷赖氨酸和精氨酸羧基端，通过多重结晶方式纯化，并进一步采取层析及超滤技术制备而得，带有动物源性。

由于胰酶可以作用跨膜蛋白和胞外基质中的蛋白质，如：钙粘素、整联蛋白等，因此胰酶现常用于解离组织和单层细胞。虽然胰蛋白酶能使细胞间的蛋白质水解从而使细胞离散，但不同的组织或者细胞对胰酶的反应是不一样的，分散细胞的活性还与胰酶浓度、反应温度和时间有关，在pH条件为7-9、温度为37℃的条件下胰酶分散细胞的作用能力最强。将EDTA添加到胰蛋白酶溶液中作为螯合剂，将钙和镁结合成六齿结构，能削弱细胞间粘附，增强胰蛋白酶对水解靶向肽键的获取。

早期的胰蛋白酶在生物制药领域的主要应用是胰岛素的生产，很快也在其他细胞培养领域应用起来。动物胰酶普遍用于血清培养，不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。

1. 胰岛素、灭活疫苗生产；

2. 组织细胞分离及培养；

3. 临床外科使用；

4. 食品行业加工助剂。

重组胰蛋白酶是一种使用基因工程技术生产的酶，具有稳定性好、纯度高、无动物来源的优点。现代生物制药的生产过程中，使用含有动物源的原料，可能会将引起人畜共患病的潜在病毒源带入产品中，如疯牛病的BSE、口蹄疫病毒等，为了减少污染源，通过基因工程技术合成胰蛋白酶，解决了传统使用的猪或牛胰蛋白酶可能带来病毒污染的风险。

重组胰蛋白酶多用重组大肠杆菌或酵母系统重组表达并经过多步层析纯化获得，无糜蛋白酶等杂酶污染。重组胰蛋白酶与天然提取的胰蛋白酶相比具有相同的特性，其氨基酸序列与猪源胰蛋白酶序列同源，能特异性切割多肽链中赖氨酸和精氨酸残基中的羧基。因其无动物源污染性和纯度高，在医药开发、生化研究、蛋白组学等领域中有着广泛的应用。

市场主流的重组胰蛋白酶是利用DNA重组技术在大肠杆菌或酵母中表达的重组猪胰蛋白酶，其氨基酸序列与猪胰蛋白酶完全一致，具有与天然胰蛋白酶相同的活性和特异性。其由223个氨基酸构成，含有6对二硫键。该酶包含两种胰蛋白酶活性形式：α-胰蛋白酶和β-胰蛋白酶。其活性受丝氨酸蛋白酶抑制剂如PMSF和TLCK等、金属离子螯合剂如EDTA等的抑制。重组胰酶用于无血清培养，同胰蛋白酶一样，不同的细胞加入胰酶的成分和浓度不一样。

1. 疫苗和重组胰岛素生产；

2. 细胞分析的组织样本制备；

3. 免疫细胞治疗；

4. 生物药物生产；

5. 蛋白质序列、结构及组学研究。

产品详细对比

细胞消化中除了用到最常见的胰蛋白酶外，还有其他很多种类的消化酶产品也可能被用到，这里做一个总结，供大家参考：

胶原酶（Collagenase）是一种肽链内切酶，能够特异性的识别Pro-X-Gly-Pro序列并切割该序列中性氨基酸（X）和甘氨酸（Gly）之间的肽键，胶原酶是唯一一种可以降解具有三股超螺旋结构的天然胶原纤维的蛋白酶，能够有效水解结缔组织和上皮组织细胞外基质内的其他蛋白、多糖和脂质，使得本品非常适用于组织消化。

1. 胶原酶Ⅰ，通常用作上皮细胞、肝、肺、脂肪和肾上腺组织细胞的制备；

2. 胶原酶II，用于心脏、骨、肌肉、肝、甲状腺和软骨等组织来源细胞的制备；

3. 胶原酶III，常用于乳腺细胞的制备；

4. 胶原酶IV，通常用于胰岛细胞的制备，或者需要维持受体完整性的细胞制备实验。

5. 胶原酶Ⅴ，适用于胰腺小岛细胞和结缔组织细胞的分离。

Accutase是包含蛋白水解酶和胶原酶活性的一种细胞消化液，是胰酶-EDTA消化液的完美替换产品，用于从常规组织培养器皿和粘附培养器皿中消化细胞。Accutase适用于组织解离和细胞分离，因分离后的细胞能保持完好的表面抗原，且不含任何动物动物或者细菌来源组分，可满足对后续如细胞表面标记、病毒生长分析、流式细胞分析以及生物反应器相关检测等多种实验的要求。

PerfCell Tryzyme™ Express 酶产品纯度高，细胞伤害小，消化作用温和，且能稳定保存在室温条件，逐渐成为不同细胞系培养的理想消化酶。这类的产品使用过程无需使用胰蛋白酶抑制剂来灭活，同时也不含有动物源，对于一些无血清生长的贴壁细胞实验更为友好。

Dispase II分散酶II，是一种非特异性金属蛋白酶，在细胞生物学中常用于从不同的组织或器官分离出单细胞，并用于后续细胞培养，如原代细胞的分离，细胞传代等，还可用于消除悬浮细胞培养过程中发生的细胞聚集。与其他细胞生物学常用蛋白酶（如胰蛋白酶、胶原酶、链霉蛋白酶等）相比，该酶具有以下优势：

1. 快速有效且温和的细胞消化酶，对细胞损伤小，且能维持细胞膜完整性；

2. 来源于细菌，无支原体或其他动物病毒污染；

3. 稳定性强，不受温度、pH及血清组分的影响；

4. 可用于多种类型组织和细胞的分离等。

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