细胞培养中胎牛血清镜下小黑点，是污染还是沉淀？

货期长又贵，先别退货。我遇到过类似情况，南美血清不同批次沉淀差异很大，尤其4℃过夜解冻后瓶底会有絮状物，分装时不混匀就容易出现黑点。你可以把现在分装好的管子放37℃水浴轻晃，回温后很多磷酸钙沉淀会溶解或减少；再低速离心取上清。同一批没拆的瓶子，提前4℃解冻后放37℃复温，再用0.45μm过滤并分装，减少反复冻融。和供应商沟通时，直接要COA和该批次运输记录，说明黑点量、大小和培养影响，问能否换同批次或等量新批次。若细胞状态没问题，这批可继续用，但建议保留照片和记录，防止后续细胞状态波动。

先别急着换批次。你这是刚解冻分装，血清沉淀最常见是磷酸钙或脂蛋白复合物，特点是小黑点大小不等、基本不动，37℃过夜数量不增长；细菌污染一般很快变浑，黑点会随菌体增殖增多。可以取2ml含黑点的血清加到无菌液体培养基里37℃放48h，若仍清亮基本可排除细菌。对293T，如果只是沉淀，分装后低速离心（500g、5min）取上清，或静置后取上清，通常不影响Western和病毒包装。但病毒包装对细胞状态敏感，建议先用处理后的血清养一代，看细胞折光、倍增和转染效率再决定。若你分装时没摇匀，瓶底沉淀会集中在后几管，这几管最好单独处理。

黑点“基本不动”更像沉淀，但支原体镜检看不到，不能用这个排除支原体。你手头这批还有未拆封的，建议先做两件事：第一，取少量血清送支原体PCR或自己用Hoechst染色看细胞核外点状荧光；第二，把黑点样品做革兰染色或普通平板培养。若不考虑污染，继续用可以选择0.45μm过滤，不建议直接0.22μm过滤——0.22μm会截留更多蛋白和脂类，对病毒包装或许影响不大但没必要。更好的办法是分装后400g离心10min，取上清使用；对293T来说，离心后的血清加进DMEM，一般贴壁和产量不会掉。Western只要细胞数够就行，病毒包装建议做个小批量对比滴度。