Question Detail
For mouse genotyping using direct tail lysis, which Taq DNA polymerase is tolerant to crude extracts?
Reagent Selection
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How to Answer This Question
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1
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Give an Actionable Answer
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Reference standards, papers or product manuals to make the answer more credible.
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All Answers4
助
助理君3701
2026-09-13
裂解方案对直扩成败影响很大。2mm鼠尾一般先用碱裂解液或含蛋白酶K裂解液在55-95℃处理，离心取上清；关键是裂解后上清不要加太多，建议先按1:5-1:10稀释后再做模板，模板体积控制在PCR体系10-15%以内，否则盐和SDS会抑制Taq。不同鼠龄和裂解批次可能需要微调：小鼠尾巴的角质和蛋白多，裂解后离心沉淀干净些。先固定一个裂解方案，别频繁换，否则出现问题很难判断是酶还是前处理。
P
PCRing
2026-09-14
鼠尾直扩建议直接选专门的小鼠尾直扩预混液或抗抑制突变Taq，不要用普通Taq硬扛。这类酶或预混液通常在buffer里加了抗SDS、蛋白酶K等裂解残留的成分，有些还带快速延伸，适合大量样品。买之前问清能否兼容碱裂解或PK裂解上清，最好要一份针对2mm鼠尾的protocol。预混液选含上样染料和Mg2+的版本，扩完直接上样，省时间。你这种样品量大，优先级是减少步骤和批间变异，而不是只比较每管单价。
生
生工大姐6618
2026-07-01
选购时我建议列四个维度：耐受性（能否直接扩增粗裂解液）、延伸速度（鼠尾常规1-2kb，快速型可缩短循环）、批间稳定性（同批鼠尾多次扩增条带一致）、是否含UNG防污染体系（实验室样品量大，防气溶胶很关键）。不要光看商家说耐受，拿到货用同一批裂解液做浓度梯度，比如模板原液、1:5、1:10，选扩增稳定、杂带少、对模板稀释不敏感的批次。记录每批酶批号，这样日后结果异常好追溯。
M
MediaPlus
2026-08-28
小包装试用价格我不能代替报价，但很多公司对直扩预混液有试用装或小规格，可以申请免费/低价试用，直接问技术支持。货期如果是本地现货一般1-3天，厂家发货可能3-5天，急就找当地代理。询价时除了单价，还要对比‘单次反应成本’，因为直扩预混液密度高，2×体系用微升级，有些看似单价高但单次便宜。要一份小试protocol和质控数据，再拿你们固定样本平行比较。
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