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全部回答5
M
Mark
2026-09-17
Fc block没做透很常见。确认用的是CD16/32单抗，浓度和孵育时间要足，我一般4 ℃预封闭15 min；染色缓冲液里加1%~2% FBS或BSA也有帮助。如果脾细胞活力不好或碎片多，非特异会明显增加，先保证单细胞悬液活率。可额外加1%~2%正常小鼠血清封闭，但要注意不要影响后续表面标记。
A
Amy9074
2026-09-14
F(ab')2片段二抗能明显减少经Fc受体的非特异结合，脾细胞Fc受体丰富，建议优先考虑。但即使用了F(ab')2，也要配合Fc block和交叉吸附。F(ab')2通常比完整IgG贵一点，流式小包装相对好找。染色时抗体要滴定，不要默认用说明书推荐量，不同脾细胞状态会有差异。做一个只加二抗的对照，能直接看出F(ab')2是否降低了背景。
N
NinaKit
2026-09-25
对照设置能帮你判断背景来源。至少做三管：未染色、只加PE二抗、同型对照一抗+PE二抗。只加二抗那管如果阳性率高，说明二抗直接结合或Fc结合；同型对照如果背景高，需换同型匹配的对照抗体。非特异高时不要盲目加补偿，先排除死细胞，可用死活染料或7-AAD圈活细胞。二抗浓度减半看看背景变化，再做滴定。
R
Reagent5677
2026-09-12
做大鼠抗小鼠CD4的间接流式，PE抗大鼠二抗没有做小鼠IgG吸附的话，会直接识别脾脏B细胞表面的小鼠Ig，背景高几乎不可避免。所以一定要选通过小鼠IgG交叉吸附验证的二抗，商品说明里一般写pre-adsorbed against mouse IgG或similar。订之前把一抗种属和大鼠Ig类型告诉销售确认，这个不是加分项，是必须项。
E
Extracter3665
2026-09-19
这类PE抗大鼠二抗100 test进口大约八百到一千五，国产会低一些，具体看品牌和代理折扣，问价时确认test定义是按100 μL染色体系还是按厂家推荐浓度。很多品牌有25/50 test小包装，建议先拿小包装做滴定和对照。货期国内现货一般1~3天，进口调货5~10天。试用装申请可以找代理或品牌技术支持，一般有活动。
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