重组蛋白复溶后放4℃保存一周，活性会不会明显下降？

不建议整瓶反复冻融。更实际的做法是复溶当天就按单次用量分装，比如你一次加10 ng/mL，按培养体积算出每次需要量，分装成20到50 µL每管，-80℃冻存。一周内频繁用时，可以取3到5管放4℃作为周内工作液，用多少拆多少，超过72小时就丢弃。工作液一定加上载体蛋白0.1% BSA，并用低蛋白吸附管。不要用含叠氮钠的缓冲液，细胞实验会被抑制。这样既避免反复冻融，也把4℃存放时间拉短到3天左右。

我做过EGF和FGF一类，掉活最常见原因不是时间，而是吸附和污染。复溶用水别用纯水长时间放，建议复溶后用含0.1% BSA的PBS或Tris缓冲液稀释到工作浓度附近，pH保持在7.2到7.4。4℃保存的管子最好用低吸附PP或硅化管，普通EP管对低浓度生长因子吸附很明显。操作时在超净台内快速分装，避免反复开盖和手温。还有一个细节：BSA要确认无内毒素、细胞培养级，不然会引入新的变量。你这种用量密度，建议按周计划制备工作液，4℃不超过5天，活性损失可比反复冻融更可控。

加0.1% BSA放4℃，一周内EGF活性一般不会完全没掉，但会有下降，具体看缓冲液pH和无菌操作。EGF小分子多肽容易吸附管壁，也容易被微生物降解。间充质干细胞增殖实验本身灵敏度中等，10 ng/mL如果活性下降20%到30%，可能看不出明显差异，但剂量-反应曲线会右移。建议做一次平行对比：同日取-80℃分装和4℃保存7天的样品，做CCK-8或EdU增殖，看EC50。若EC50偏差小于20%，一周内可以接受；若要做严格结论，别只用形态变化判断。