GST标签蛋白纯化预装柱1ml 蛋白纯化预装柱

Q：为什么洗脱组分中无目的蛋白？

A：过度的裂解使目的蛋白变性，建议使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。

Q：为什么柱子反压过高？

A：可能是缓冲液太黏稠，有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高， 降低操作流速。

Q：为什么目的蛋白没有完全洗脱下来？

A：可能是洗脱液中谷胱甘肽浓度太低，建议增加洗脱液中谷胱甘肽浓度，可尝试用50 mM Tris-HCl，20-40 mM 还原型谷胱甘肽pH 8.0 洗脱。

Q：为什么电泳或 Western Blot 检测中发现多条带？

A：可能是抗体与E. coli 的各种反应，建议抗体吸附E. coli 蛋白：GST-抗体；超声处理去除 GST 抗体，可以用 Western Blot 检测。

Q：洗脱液怎么配？

A：按说明书用平衡缓冲液配制还原性谷胱甘肽（Cat#60342ES）即可，配完后需要检测PH是否跟平衡缓冲液一致，一般谷胱甘肽溶解后pH会偏酸，需重新调整到pH 7.4或pH 8.0（建议调整到pH 8.0，适当提高pH能提高洗脱效率）。