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Q1:该NK细胞来源的外泌体产品标注含量为100μg,实际为液体形态,请问每支分装的体积是多少?
A:每支分装体积约为60μL,具体体积因不同批次的浓度差异而略有调整。
Q2:NK细胞外泌体常规包装规格为100 μg,请问该剂量是由多少体积的细胞上清液纯化而来?
A:通常每1 L细胞上清液可提取约3 mg外泌体。但由于成品外泌体经过浓缩步骤,过程存在较大损耗,因此无法直接换算。具体得率需根据实际实验数据评估。
Q3:NK细胞外泌体采用何种纯化方法?
A:采用切向流过滤结合层析法进行纯化。
Q4:针对外泌体的检测,需采用WB方法检测CD63和CD9。请问在添加Loading Buffer时是否需要加热处理?如需加热,具体温度和时间应如何控制?
A:需要。 1/4 体积的 5× SDS-PAGE蛋白上样缓冲液,100℃加热10分钟。多次跨膜蛋白(如CD9)建议70℃加热10分钟,以避免蛋白聚集或变性。
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