iFluor 750 phalloidin iFluor 750标记鬼笔环肽（红色）

Q: 为什么激发后荧光很快就猝灭了？

A:1.可能是使用浓度过高造成，可以再适当降低一些试剂浓度；可以在寻找视野时使用低能量的激光，待找到合适视野时使用高能量激光激发观察。2.鬼笔环肽不能和点击反应（例：EDU）共染色，否则鬼笔环肽没荧光信号。

Q: 每次是添加多少试剂量（工作液）进行荧光显微镜检测？

A: 建议添加的量是能够完全浸没细胞即可，不同的细胞染色情况不同，相应鬼笔环肽使用量也需根据不同情况而定。

Q: 可以用哪些溶液来固定细胞，要注意什么？

A: 可以用溶于PBS的4%多聚甲醛溶液进行细胞固定，固定时避免固定剂中含有甲醇成分，因为甲醇在固定过程中可能破坏肌动蛋白F-actin。

Q: 为什么用鬼笔环肽结合 F-actin 标记石蜡切片，没有看到信号？

A: 当细胞和组织经由二甲苯或丙酮之类的溶剂处理时（例如组织切片脱石蜡期间），它通过阻止鬼笔环肽结合的方式来影响F-actin。可以使用通常不用有机溶剂洗涤的冷冻切片代替石蜡切片，或者可以使用抗肌动蛋白抗体。

Q: 鬼笔环肽染色 F-Actin, 有的染上，有的没染上，并且染色信号较弱？

A: 1.摸索鬼笔环肽最佳染色工作液浓度及染色时间。2.细胞未固定好，建议使用新鲜配置的4%多聚甲醛进行固定。3.细胞未透化彻底，透化时间可相应延长。