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News翌圣TdT末端转移酶助力DNA甲基化测序！

📂 工具酶 Type ID 5005

👁 14,610 views 🗓 2026-10-13 Source ID：3207

DNA甲基化测序是研究中的一个重要的工具手段，TdT末端转移酶作为DNA甲基化测序的关键酶之一，发挥了至关重要的作用，接下来小翌将围绕它的作用方式、应用场景等方面进行介绍。

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/3207 ↗

甲基化是研究非常深入的表观修饰之一，大量实验表明甲基化水平与肿瘤发生发展、生长发育、衰老等都有非常密切的关系，是近年来的研究热点之一。DNA甲基化测序是研究中的一个重要的工具手段，TdT末端转移酶(Terminal deoxynucleotidyl transferase)作为DNA甲基化测序的关键酶之一，发挥了至关重要的作用，接下来小翌将围绕它的作用方式、应用场景等方面进行介绍。

图1.DNA甲基化与肿瘤发生的联系[1]

TdT末端转移酶是非模板依赖的DNA聚合酶，单链和双链DNA分子均可作为TdT末端转移酶的底物，在辅因子Co2+的作用下，能够催化dNTP结合到DNA分子的3′羟基端。TdT末端转移酶可以被应用到TUNEL检测、甲基化文库构建、cDNA文库构建、酶促法合成DNA等技术中。

图2. TdT末端转移酶作用方式[2]

DNA甲基化测序文库构建

随着DNA甲基化研究的深入，其检测方法也多种多样，包括甲基化荧光PCR法（MethyLight）、全基因组亚硫酸氢盐测序(WGBS)、高效液相色谱法（HPLC）等等。随着技术的更新迭代，一种TdT辅助连接甲基化建库的方法被研究出来，其构建流程如下：

图3. DNA甲基化建库流程

重亚硫酸盐（Bisulfite）处理DNA，使未甲基化修饰的胞嘧啶C转化为尿嘧啶U，变性为ssDNA。
3′接头连接，TdT末端转移酶参与目的DNA 3′端添加接头的过程，催化ssDNA的3′羟基端加上同聚物尾巴（示意图中橙色曲线部分），从而在连接酶的作用下与接头进行连接。
DNA二链合成，5′接头连接。
PCR扩增获取含有完整接头序列的上机文库。

TUNEL检测细胞凋亡

TdT末端转移酶也可参与凋亡细胞的检测中。DNA断裂是细胞凋亡的重要特征，晚期可以形成180-200bp的DNA断裂碎片。染色体DNA双链断裂或单链断裂会产生大量的黏性末端，在TdT末端转移酶的作用下，荧光素/酶标记的dUTP结合到DNA的3′端，通过荧光检测完成对细胞凋亡的检测。