Buying GuidesTaq DNA聚合酶选购指南

在分子生物学研究与临床检测领域，PCR 技术的高效性离不开核心工具 ——DNA 聚合酶的稳定支撑。DNA聚合酶，是以亲代DNA为模板，催化底物dNTP分子聚合形成子代DNA的一类酶。1957 年，DNA 聚合酶 Ⅰ （（DNA polymeraseⅠ，简称polⅠ））首次在大肠杆菌中被发现，开启了 DNA 复制研究的新纪元；1988 年，Saiki等从耐热菌 Thermus aquaticus中分离出来的Taq DNA 聚合酶是最有名的热稳定DNA聚合酶之一，它实现了长时间的反应稳定性，为PCR方法的改进提供了无限可能。

Taq DNA聚合酶全长由832个氨基酸残基组成，分子量为94 kDa，包括三个主要结构域，其三维立体结构如图所示。位于 N 端第 1-291 位氨基酸构成了 5’-3’核酸外切酶活性结构域，可应用于TaqMan探针的水解；第292-423位基酸构成了 3’-5’核酸外切酶结构域，但该结构域没有活性；第424-832 位氨基酸构成了 5’-3’聚合酶活性结构域，该结构域的三维立体结构如同人的右手，可分为拇指区、手指区和手掌区。其中拇指区负责维持DNA聚合酶与引物-模板复合物的紧密结合，进一步有助于 DNA聚合酶的延伸；手指区负责结合dNTPs；手掌区是二价金属离子结合的活性区域，负责调节结合的dNTPs与引物 3’-OH端发生反应时周围的化学环境，从而介导和催化反应的进行。

图1. Taq DNA 聚合酶的三维立体结构

翌圣生物依托 ZymeEditor™双向分子酶理性设计和定向进化平台，研究人员基于 DNA 聚合酶的结构解析与多来源酶序列比对，通过定点诱变、随机突变定向筛选、压力测试及酶蛋白片段重组等多种技术手段，对 Taq DNA 聚合酶进行全方位定向改造，获得了一系列优势突变体。再结合高性能单克隆抗体研发平台，筛选出的高封闭率抗体结合不同表位，进化出多种热启动Taq DNA聚合酶，以满足不同终端应用的需求。

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