NewsT4 RNA连接酶2 |T4 RNA Ligase 2截短型，small RNA建库研究首选工具
专为small RNA建库设计，减少接头串联或自连，提高测序文库的质量。
在高通量测序技术日新月异的当下，small RNA（涵盖 miRNA、siRNA、piRNA 等）研究已然成为探索生命调控奥秘的关键领域。而基于T4 RNA连接酶的建库技术，作为small RNA研究的核心环节，却长期受两大技术难题困扰：
①连接效率欠佳：传统T4 RNA连接酶对短链RNA适配性不足，极易产生接头自连等副产物，致使文库出现严重偏好性；
②末端偏好性显著：普通酶易受RNA二级结构或末端修饰影响，从而导致数据偏差。
图1.传统T4 RNA连接酶在small RNA建库中的应用流程示意图[1]
如今，T4 RNA连接酶2截短型（T4 RNA Ligase 2, truncated，T4 Rnl2tr）的问世，彻底改写了small RNA建库技术格局。该酶能够特异性催化5´端预腺苷化的DNA/RNA与RNA 3´-OH末端的连接反应。其独特之处在于无需ATP参与，不过必须搭配5´端预腺苷化接头使用。当它与T4 RNA ligase 1协同运作时，可实现打断RNA的直接接头连接，有效遏制接头串联和自连现象，大幅提升测序文库的构建质量。
图2.T4 Rnl2tr联合T4 RNA ligase 1在small RNA建库中的应用流程示意图[2]
在此，我们向您推介翌圣生物全新研发的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）。这款酶作为T4 Rnl2tr的双点突变体（R55K, K227Q），在保持高效连接活性的同时，极大程度降低了RNA的非特异性连接问题，诸如 RNA 串联或自连成环等情况，堪称small RNA 3'端接头连接和cDNA文库构建的绝佳之选。
目前，翌圣生物已成功构建起完备的T4 RNA连接酶产品矩阵，满足您多样化的科研需求。其特点及应用见下表：
T4RNA连接酶类型 | （Cat#14651） | （Cat#14652） | （Cat#14655） | （Cat#14653） |
主要应用 | 单链RNA连接 | 双链RNA连接 | 与T4 Rnl2tr相似，但减少了副产物 | 与T4 Rnl2tr相似，但减少了副产物 |
ATP依赖性 | 是 | 是 | 否 | 否 |
连接子要求 | 不需要预腺苷化的连接子 | 不需要预腺苷化的连接子 | 需要预腺苷化的连接子 | 需要预腺苷化的连接子 |
酶活性 | 高 | 高 | 高，相比T4 Rnl2tr，减少副产物 | 高，相比T4 Rnl2tr，减少副产物，连接活性一致 |
特点 | 无特定突变 | 无特定突变 | ATP非依赖性，K227Q突变减少了酶的赖氨酸腺苷化活性 | ATP非依赖性，K227Q突变减少了酶的赖氨酸腺苷化活性， R55K突变提高了酶的连接活性 |
优势 | 广泛应用于单链RNA连接 | 广泛应用于双链RNA连接 | 减少了副产物 | 优化了连接效率，减少了副产物 |
应用 | 1. ssRNA分子内/间连接和环化； 2. ssRNA和ssDNA分子间连接; 3. 单链Oligo RNA的合成； 4.miRNA等5’端RNA在克隆、建库或PCR检测时接头添加、cDNA文库构建。 | 1. 连接双链RNA中缺刻的连接； 2. RNA 3'羟基与DNA 5'磷酸基的缺刻连接； 3. 在RNA夹板的帮助下实现ssRNA末端的连接，但不适用于短RNA前体。 | miRNA等3’端羟基的单链RNA在克隆、建库或 PCR检测时接头添加、cDNA文库构建 | |
性能展示
翌圣T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ（Cat#14653）
超强切割活性，媲美进口品质
使用翌圣和来自进口Supplier A*的T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分别按照不同投入量加入体系中对31 nt的ssRNA底物（Substrate 1）和17 nt预腺苷化的ssRNA底物（Substrate 2）进行连接实验。结果表明，翌圣产品能高效连接 ssRNA 底物，连接效果与进口产品不相上下。
图3.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ连接效果验证
无核酸外切酶、切口酶、RNase酶残留
将200 U T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ分别与核酸底物孵育，并通过琼脂糖凝胶电泳分析谱带变化。实验结果表明，翌圣的3个批次T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ均未检测出核酸外切酶、切口酶或RNase 残留，为您的实验结果准确性与可靠性保驾护航。
图4.T4 RNA Ligase 2, Truncated KQ核酸外切酶、切口酶、RNase残留检测结果
参考文献：
[1] Raabe C A , Thean-Hock T , Juergen B ,et al.Biases in small RNA deep sequencing data[J].Nucleic Acids Research, 2014(3):1414-1426.DOI:10.1093/nar/gkt1021.
[2] Sorefan K , Pais H , Hall A E ,et al.Reducing ligation bias of small RNAs in libraries for next generation sequencing[J].Silence, 2012, 3(1):4-4.DOI:10.1186/1758-907X-3-4.
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