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Applications手把手教你做出RT-qPCR最美曲线(一)：1:1提取高品质RNA

📂 qPCR系列 Type ID 5003

👁 10,757 views 🗓 2026-10-12 Source ID：2486

想要提取到高质量的RNA并非易事。今天，小翌主要从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面来阐述RNA提取过程需注意的关键要点，以辅助后续的qPCR实验顺利进行。

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/2486 ↗

RNA提取是RT-qPCR实验成功的首要步骤，RNA的质量直接关乎RT-qPCR实验的结果。但是在实验过程中我们经常会碰到RNA提取实验翻车的情况，主要是因为RNA的分子结构不稳定和无处不在的RNase对RNA的降解造成的。

由此可见，想要提取到高质量的RNA并非易事。今天，小翌主要从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面来阐述RNA提取过程需注意的关键要点，以辅助后续的qPCR实验顺利进行。

样本的选择

样本最好选择处于生长旺盛期的新鲜细胞，新鲜、生长旺盛的动物组织，新鲜幼嫩的植物组织。

样本采集和保存

» 快速处理：获取样本后，最好立即提取RNA，或者在液氮中速冻样本≥1h，之后冻存于-80℃冰箱。

注：液氮速冻需确保组织块足够小，在浸入液氮后几乎立即冻结，以确保RNase瞬间失活，稳定样本中的RNA。

» RNA稳定液处理：若采样不方便携带液氮，可将样本放入RNA稳定液中，迅速渗入组织，灭活内源RNase，以稳定和保护样本中的RNA。建议组织样本大小<0.5 cm，保证RNA稳定液可渗透到组织内部。一般4℃保存过夜，之后冻存至-80℃冰箱。（翌圣动植物组织RNA稳定液，持久保护组织RNA完好无缺，点击可产看产品详情→10604ES60）

注：Trizol为裂解液，可用于保存细胞，但不适用于组织样本保存。当细胞存放在Trizol中需注明每管的细胞数量。

其他Tips

»避免环境中RNase的污染

1）实验台面最起码要用75%的酒精擦拭干净，操作过程中应佩带口罩、手套和帽子等；

2）研钵等器具应在使用前于180℃的高温下干烤6h或更长时间；枪头和离心管等耗材要用 DEPC处理或购买RNase-free耗材；

»避免试剂中RNase的污染

提取过程中用到的水/缓冲液要确保是RNase-free的。

»提取RNA的过程需去除gDNA，避免其对后续RT-qPCR实验的影响

»根据样本和实验需求，选择合适的RNA提取方法

常见的RNA提取方法

1. 沉淀法

»原理

Trizol中含有苯酚、异硫氰酸胍、β-巯基乙醇，可裂解样本释放核酸，并抑制RNase活性。加入氯仿离心分层，收集上清，经异丙醇沉淀得到总RNA

»特点

得率高，样本适用性广泛，但是纯度相对较低

»推荐货号

Trieasy (货号：10606)

2. 离心柱法

»原理

高盐吸附、低盐洗脱

» 特点

得率高，样本适用性广泛，但是纯度相对较低

» 推荐货号

培养细胞RNA提取试剂盒(货号：19231）
组织/细胞RNA提取试剂盒（货号：19221）
多糖多酚植物RNA提取试剂盒（货号：19292）

在此，给大家介绍一款11min即可完成培养细胞RNA提取的的柱式提取试剂盒：培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）。

» 产品特点：

产品特点优势

»案例展示：

使用培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）和O品牌常规细胞/组织RNA提取试剂盒各提取2份293T细胞（10^6个细胞）的总RNA。结果显示，该试剂盒提取到的目标RNA产量一致，但纯度更高，如表1和图2。

表1. Nanodrop测定RNA浓度

Nanodrop测定RNA浓度

备注：Y1，Y2代表培养细胞RNA提取试剂盒（Cat No.19231）；O1，O2代表O品牌常规细胞/组织RNA提取试剂盒

hGAPDH扩增结果

▲ 图2a.hGAPDH扩增结果

hBC6扩增结果

▲ 图2b.hBC6扩增结果

图2. 培养细胞RNA提取试剂盒的定量结果与O品牌基本一致。取1 μL洗脱液反转录，以cDNA的10倍稀释液为模板，定量测试 hGAPDH 和 hBC6 2个基因

综上，小翌从样本选择、样本采集与保存、RNA提取这三个方面阐述了提取高质量RNA的关键要点，下期小翌将讲解RNA质量评估以及RNA降解对qPCR实验结果的影响等方面的内容，我们下期不见不散~

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类别	产品名称	货号	规格
RNA提取	TRIeasy™ Total RNA Extraction Reagent TRIeasy™总RNA提取试剂	10606ES60	100mL
	MolPure^® Cell RNA Kit 培养细胞RNA提取试剂盒	19231ES50	50T
	MolPure^® Cell/Tissue Total RNA Kit 细胞/组织总RNA提取试剂盒	19221ES50	50T
	MolPure^® Plant Plus RNA Kit 多糖多酚植物RNA提取试剂盒	19292ES50	50T
逆转录	Hifair^® Ⅲ 1st Strand cDNA Synthesis SuperMix for qPCR (gDNA digester plus)	11141ES60	100T
qPCR	Hieff UNICON^® Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix	11184ES08	5*1mL

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Source: Yeasen Biotech

Original URL: https://www.yeasen.com/solutiondetail/2486

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