技术讲解“酶”你不可，重组RNase A，告别动物来源！

RNase是一类普遍存在的酶，真核生物、古细菌和细菌中至少存在21种类型的RNA酶，在基因表达和调控、基因组复制和维持、宿主防御、应激反应、病毒感染等生物学过程中发挥重要作用。其中，RNase A是使用较为广泛的一种核糖核酸酶。

核糖核酸酶A(RNase A)是核糖核酸酶家族中具代表性的成员之一。它早期从牛胰腺组织中分离得到，并被广泛研究。RNase A具有高度特异性和高效性的RNA降解能力，通过切割RNA分子来调控细胞内的RNA代谢功能。RNase A的反应条件极广，且极难失活。RNase A作用于单链RNA时，表现较高作用效果。

核糖核酸酶(RNase)在生物体内起着重要的作用，几乎可以从任何一种原核生物与真核生物细胞中找到它的存在。它们具有降解和分解核糖核酸(RNA)分子的能力，参与调控细胞内的RNA代谢和功能调节。根据其结构和功能特点，核糖核酸酶可以分为多个分类，如核糖核酸酶P(RNase P)、核糖核酸酶L(RNase L)等。

核糖核酸酶A(Ribonuclease A/RNaseA)是经过蛋白质工程技术改造的源于牛胰腺(bovine pancreas)的非特异性核糖核酸内切酶，经过酵母表达、纯化获得。它不含有原核生物表达的细菌内毒素。在功能上，RNase A是一种核糖核酸内切酶，可以水解核苷上5-核糖与相邻的嘧啶核苷3’-核糖上的磷酸基团之间的磷酸二酯键，产生的2’,3’-环磷酸可水解为相应的3’-核苷磷酸盐。因而可在C和U核苷酸残基位置特异性地降解单链RNA。RNase A十分稳定。RNaseA作用于单链RNA时，表现较高作用效果。

RNase A 作用于单链RNA时，表现较高作用效果。推荐工作浓度为10-20μg/mL，兼容于各种反应体系。

将牛胰RNaseA、10418ES重组核糖核酸酶A进行SDS-PAGE验证，结果显示：10418ES重组核糖核酸酶A纯度≥90%。

采用500 ng标准品RNA样本，分别用1 μg牛胰RNaseA和10418ES重组核糖核酸酶A进行消化，消化5 min后进行核酸电泳，结果显示：10418ES重组核糖核酸酶A的消化能力和牛胰RNaseA相当。

500 ng DNA样本中，分别用1 μg牛胰RNaseA和10418ES重组核糖核酸酶A进行消化，消化10 min后进行核酸电泳，结果显示：10418ES重组核糖核酸酶A对DNA没有消化作用，无DNase残留。

在不同的反应温度下，检测RNaseA的活性，结果显示：温度范围在15-70℃期间都具有酶活性，在60℃时达到峰值。

将RNaseA分别放25℃和37℃储存，实时监测酶活，结果显示：25℃和37℃储存4个月，酶活稳定。