Techniques全示踪/半示踪qPCR Mix原理和区别

一、为什么要示踪？

实时荧光定量PCR（qPCR）是分子生物学最核心的定量工具之一。然而在日常实验中，96孔乃至384孔板的操作一直是痛点：

• 漏加样：孔数多、布局复杂，某孔忘记加模板或Mix而不自知；
• 错加样：同一样品加两遍，另一个样品却空着；
• 标识困难：透明PCR板/管在白色光下难以看清液滴。

示踪染料的出现，正是为了解决这些"看不见"的问题。通过在预混液中加入惰性可见染料，让操作者能用肉眼判断加样进程，大幅降低失误率。但同样是"示踪"，不同产品的技术深度却大有不同。

二、示踪染料的分类与原理

根据示踪机制的深度，可以将市面上的qPCR示踪产品分为两大类：半示踪（单一染料示踪）和全示踪（变色反应示踪）。

2.1 半示踪 qPCR Mix（单一染料示踪）

半示踪的核心价值：

在白色背景板或透明管中，预混液本身的蓝色能让操作者确认枪头确实有液体、试剂液体确实加进了孔。

2.2 全示踪 qPCR Mix（变色反应示踪 — ColorGPS™）

ColorGPS™ 的核心价值：

真正实现"移液追踪"（Pipetting Tracking）。建板时，先点一排 Mix（蓝色），再逐一加模板（变为蓝绿色）。走到下一排回头一扫，蓝色孔是未加样、蓝绿色孔是已加样，一眼识别漏加/错加，大大提高建板效率和准确性。

三、示踪染料系统深度对比

ColorGPS™ 独特组分说明：

全示踪产品（11188/89/90ES）额外包含一瓶10× Dilution Buffer，该稀释液呈黄色，用于模板的预稀释。当黄色稀释模板与紫粉色预混液混合时，发生颜色叠加反应，变为蓝绿色。这一"显色变化"就是实现全示踪的关键技术所在。而半示踪产品只有单一预混液，不配备稀释液，因此不具备变色条件。

四、全示踪与半示踪产品性能对比

五、选型指南：什么时候选哪种？

5.1 选半示踪的场景

· 操作经验丰富，仅需确认"试剂液滴加到了孔中"；

· 建板量不大（半板/单排），操作从容；

· 预算优先，追求基础功能与性价比；

· 实验室使用全平台通用型产品（11184ES），不想区分ROX型号；

5.2 选全示踪（ColorGPS™）的场景

· 大批量建板（整板96孔/384孔），容易出现漏加/错加；

· 实验室新手/学生操作，需要可视化辅助；

· 同时进行多板加样，需要快速定位加样进度；

· 希望最大限度降低因加样误差导致的重复实验成本；

· 对qPCR结果重复性要求极高（如诊断/IVD研发）；

· 可选择合适的ROX型号获得最优信号校正效果。

六、翌圣推荐产品一览

以下为翌圣生物 ColorGPS™ 全示踪系列及半示踪系列核心产品清单：

全示踪系列 — Hieff UNICON® ColorGPS™

半示踪系列

七、选购小贴士

• 关于ROX

选购ColorGPS系列时，请根据您实验室的qPCR仪器选择对应的ROX版本（No Rox / Low Rox / High Rox）。11184ES Universal Blue为预混ROX，全平台通用，无需区分。

• 关于稀释液

ColorGPS系列配备10× Dilution Buffer（黄色），用于模板稀释后获得最佳变色效果。可以直接用无酶水稀释模板，但使用Dilution Buffer可获得最明显的颜色变化。

• 关于存储

所有产品均需 -25~-15°C避光保存。使用前上下颠倒混匀后轻微离心即可。ColorGPS系列反复冻融20次不影响性能。

• 关于10μL体系

全示踪产品同样支持10μL反应体系，但建议首次使用20μL体系以确保ROX浓度正常，避免BadRox报告。

八、总结

「全示踪 vs 半示踪」的本质区别不在于"有没有染料"，而在于"能不能通过颜色变化区分加样状态"。

半示踪（Blue/Color系列）：蓝色预混液，加样可见，但加完分不清，适合小批量、有经验的操作者。

全示踪（ColorGPS™系列）：紫粉色→蓝绿色的变色反应，每一孔加样后颜色改变，"已加"与"未加"一目了然，适合大批量建板、多板并行、新手操作或对重复性要求极高的场景。