Article Detail

选购指南PCR替代方案！超全等温扩增RPA产品选择指南，助力现场快速检测！

📂 产品解读类型 ID 5001

👁 10,541 次浏览 🗓 2026-10-09 源站内容 ID：2018618573414256640

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是Piepenburg等人在2006年利用重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶等开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。该技术能够在10~30 min内进行恒温（37~42℃）下的单分子核酸检测，它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检

来源：翌圣生物｜原文：https://www.yeasen.com/solutiondetail/2018618573414256640 ↗

重组酶聚合酶扩增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA）是Piepenburg等人在2006年利用重组酶、单链DNA结合蛋白和链置换DNA聚合酶等开发出的一种新的核酸恒温扩增技术。该技术能够在10~30 min内进行恒温（37~42℃）下的单分子核酸检测，它具有反应灵敏度高、特异性强、对仪器依赖程度低且可整合多种检测模式等优点，特别适用于基层和现场即时检测，可广泛应用于体外诊断、兽医、食品安全、生物安全、农业等领域，有望成为聚合酶链式反应 (PCR) 替代方案。

RPA技术简介

RPA技术的原理是重组酶蛋白与引物（A）形成复合物，能在双链DNA中寻找同源序列（B）。然后通过重组酶（C）的链置换活性将引物插入同源位点，并且单链结合蛋白稳定置换DNA链（D）。随后重组酶被分解，使得引物的3'末端被链置换并与DNA聚合酶结合（E），使其延长引物（F），通过循环重复该过程对模板上的目标区域进行指数式扩增。

图1. RPA等温扩增技术原理图

RPA技术检测方法

电泳法

基础型RPA检测方案，仅需在反应体系中加入一对特异性引物进行扩增，然后对扩增产物进行纯化，再进行琼脂糖凝胶电泳即可实现对检测结果的判读。

荧光探针检测法

向基础型RPA反应体系中加入核酸外切酶Ⅲ(exonucleaseⅢ，exo)和exo荧光探针，或加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶(formamide pyrimidine DNA glycosylase，fpg)和fpg荧光探针，用荧光定量仪来实时检测RPA反应。

1） exo探针法：在RPA的基础上，加入了核酸外切酶III（exonuclease III，即exo）和exo荧光探针，核酸外切酶III会特异地切割荧光探针（THF位点），荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。

图2. exo探针法检测原理图

2）fpg探针法：在RPA的基础上，加入甲酰胺嘧啶-DNA糖基化酶（fpg）及fpg荧光探针，当探针与模板结合时，fpg酶识别dR连接臂（dR group）并切割该位点，使得荧光基团与淬灭基团分开，发出荧光信号，通过荧光收集的仪器来实时监控荧光值的变化。

图3. fpg探针法检测原理图

侧流层析试纸条（LF-RPA）

在RPA的基础上，加入核酸外切酶Ⅳ（endonuclease Ⅳ，即nfo）、nfo探针和生物素标记的反向引物。当nfo探针与模板链互补时，核酸外切酶Ⅳ识别并切割THF残基位点，扩增获得既有探针标记物又有引物标记物的扩增子。然后加入对应的标记抗体，就能看到试纸条检测线上的结果条带。

图4. NFO探针法检测原理图

翌圣RPA体系核心原料

翌圣Zyme Editor™ 酶改造平台针对RPA技术，目前已获得RPA全系列性能优良的产品，包括链置换Bsu DNA polymerase、T4 UvsX Recombinase、T4 UvsY protein、T4 gene 32 protein、Exonuclease III等，搭配通用的扩增反应液，可满足不同用户对于各种检测体系的探索。同时，翌圣生物核心应用研发团队，经过缓冲液中各种离子配比的调试、酶的组合优化、多种辅因子添加等开发了适用于荧光型、层析型、电泳型三种方法进行核酸检测的常规液体型RPA预混液以及冻干粉形式，使用时只需加入特异性引物/探针、模板，30min左右即可完成检测，满足各种应用场景的快速检测需求。

电泳型RPA预混液部分数据展示

不同GC含量和片段长度扩增

图5. (A) 16727扩增不同GC含量靶标；（B）16727扩增不同长度靶标

使用16727ES依次扩增GC含量为40%-70%的靶标及长度100bp-500bp的靶标，阳性均能够出现明显、唯一的电泳条带，阴性均无明显条带，表明该产品对于不同GC含量及不同长度的靶标均能完成扩增。

稳定性测试

图6. (A) 16728正常保存稳定性测试；（B）16728冻融10次稳定性测试；（C）16728在37℃放置5天稳定性测试

考察16728的反复冻融和热加速稳定性，使用干冰将16728试剂反复冻融10次或者将16728在37℃条件下放置5天后，与正常保存的16728试剂，同时检测两个浓度靶标（P1-10 copies/μL,P2-2 copies/μL)，不同条件处理的16728试剂，两个浓度电泳条带明显、唯一，表明16728试剂稳定性良好。

灵敏度

图7. 16727和友商产品灵敏度比较

使用16727和市面上同类产品，同时检测竞品试剂盒中梯度稀释的阳性对照模板，检测结果显示，16727检测灵敏度更有优势。

翌圣RPA产品选择指南

产品大类	产品名称	产品货号	产品类型/作用
RPA Kit （液体型）	DNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent）	16702ES	荧光型RPA Kit（Exo探针法）
	RNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent）	16708ES	荧光型RT-RPA Kit（Exo探针法）
	DNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi）	16725ES	层析型RPA Kit（Nfo探针法）
	RNA Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi）	16726ES	层析型RT-RPA Kit（Nfo探针法）
	DNA Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic)	16727ES	电泳型RPA Kit
	RNA Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic)	16728ES	电泳型RT-RPAKit
RPA Kit （冻干粉）	DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent）	16904ES	荧光型RPA （Exo探针法）（原位冻干粉）
	RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Fluorescent）	16905ES	荧光型RT-RPA（Exo探针法）（原位冻干粉）
	DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi）	16906ES	层析型RPA （Nfo探针法）（原位冻干粉）
	RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit（Chromatographi）	16907ES	层析型RT-RPA（Nfo探针法）（原位冻干粉）
	DNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic)	16908ES	电泳型RPA （原位冻干粉）
	RNA Lyo Rapid Isothermal Amplification Kit (Basic)	16909ES	电泳型RT-RPA （原位冻干粉）
单组份	Bsu DNA polymerase (Large fragment, 5 U/μL)	11078ES	结合引物与原始靶核酸序列互补合成新的DNA模板
	T4 UvsX Recombinase (2 μg/μL)	11079ES	具有配对和链转移活性的重组酶
	T4 UvsY protein (2 μg/μL)	11080ES	重组酶辅助因子，刺激T4 UvsX的单链DNA依赖性ATP酶活性并降低活性所需的T4 UvsX临界浓度
	T4 gene 32 protein (gp 32) T4噬菌体基因32编码蛋白	11081ES	参与DNA复制、修复、重组与解链后的单链DNA结合，防止自杂交
	Creatine Kinase (2 μg/μL)肌酸激酶	14502ES	刺激ATP和肌酸分解为磷酸肌酸和ADP，释放能量
	Exonuclease III (100 U/μL)	14525ES	具有3’→5’外切酶活性，切断荧光探针中淬灭基团，释放荧光
	2× RPA Amplification Buffer	16928ES	RPA通用buffer

来源与原文

来源： 翌圣生物

原文链接： https://www.yeasen.com/solutiondetail/2018618573414256640

源站内容 ID：2018618573414256640

本站内容整理自翌圣生物官网公开资料，版权归原作者所有；如涉版权问题请联系本站删除。

本篇涉及的产品关联来自源站内容