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Applications从神经到类器官：N2与B27的应用场景全解析

📂 干细胞/类器官 Type ID 5003

👁 461 views 🗓 2026-10-09 Source ID：2082027206688022528

在神经细胞培养中，血清的使用一直是一个两难的问题。血清确实提供了细胞生长所需的多种营养因子，但其成分复杂、批次间差异大，且可能诱导细胞非预期分化。如何在提供充足营养支持的同时，保持培养体系的可控性和可重复性？N2和B27两款经典的无血清添加剂，为这一问题提供了成熟的解决方案。如今，这两款添加剂的应用范围已远远超出神经细胞培养的范畴，广泛覆盖了神经、上皮、肿瘤

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/2082027206688022528 ↗

在神经细胞培养中，血清的使用一直是一个两难的问题。血清确实提供了细胞生长所需的多种营养因子，但其成分复杂、批次间差异大，且可能诱导细胞非预期分化。如何在提供充足营养支持的同时，保持培养体系的可控性和可重复性？N2和B27两款经典的无血清添加剂，为这一问题提供了成熟的解决方案。

如今，这两款添加剂的应用范围已远远超出神经细胞培养的范畴，广泛覆盖了神经、上皮、肿瘤模型以及类器官系统等。

一、来源与设计初衷

N2添加剂最初由Jane Bottenstein于上世纪80年代开发，其设计目的是在无血清条件下支持神经母细胞瘤细胞系的生长。配方基于Bottenstein‘s N-1 formulation优化而来。N2添加剂以100X浓缩液形式提供。

图1. N-2与NSC-27 （等同于B27）无血清添加剂

B27添加剂则是由Gregory Brewer等人为原代胚胎神经元的培养专门设计的。B27添加剂以50X浓缩液形式提供。自1993年首次报道以来，B27已在神经科学领域积累了超过三十年的应用历史。

两者最根本的区别在于：N2源于肿瘤细胞系培养，B27源于原代神经元培养。这一设计初衷的差异，直接决定了两者在配方和应用场景上的不同侧重。

二、应用场景

N2添加剂主要应用于：

神经干细胞和神经祖细胞的扩增

中枢神经系统（CNS）与周围神经系统（PNS）来源的神经元培养
神经母细胞瘤细胞系（如SH-SY5Y）的培养
多能干细胞的神经定向分化
类器官来源神经元的培养

B27添加剂主要应用于：

原代海马神经元和皮层神经元的长期培养与功能维持
神经干细胞的维持与扩增
神经祖细胞的培养
脑类器官的培养

近年来B27和N2的应用已从神经细胞培养大幅拓展至类器官与肿瘤类器官领域。在胃癌、肝癌、乳腺癌、小肠、结肠、胰腺、肺、视网膜、肝脏等多种组织来源的类器官构建中，B27和N2已成为培养基配方的核心组分。在肝细胞癌类器官培养中，B27和N2可提供维持细胞存活与干性所必需的基础营养成分，为细胞的生长提供营养支持。

图2：正常人体组织的类器官模型补充成分及培养时间

三、如何选择？

考量维度	N2添加剂	B27添加剂
原始设计用途	神经母细胞瘤细胞系	原代胚胎神经元
配方复杂度	相对简单	更丰富
核心功能	促进增殖，维持未分化状态	支持长期存活与功能成熟
推荐细胞类型	神经干细胞/祖细胞、神经瘤细胞系	原代神经元、海马/皮层神经元
推荐培养周期	短期扩增	长期培养（>14天）
标准工作浓度	1%（100X稀释）	2%（50X稀释）
类器官应用	神经类器官、肿瘤类器官等	多种组织类器官（肝、胃、肠、乳腺等）

图1. N-2与NSC-27 （等同于B27）无血清添加剂

在神经细胞培养中，常采用序贯策略：增殖阶段使用N2，分化阶段切换至B27。在类器官培养中，两者常联合使用，例如胃癌类器官培养基中同时添加1×B27和1×N2。此外，B27还有多种配方变异可供选择——不含维生素A的B27版本（B27 without Vitamin A），因视黄酸可能诱导神经干细胞向神经细胞分化，对于需要维持神经干细胞未分化状态的研究，应选用该版本。

图3：小鼠小肠类器官（左）与肝癌类器官（右）

四、操作要点

N2（100X）：1:100加入基础培养基（DMEM/F12或Neurobasal）。

B27（50X）：1:50加入Neurobasal培养基，终浓度2%（v/v）。

注意事项

添加剂应避免反复冻融，分装后-20℃避光保存；完全培养基2-8℃避光保存约2周；全程无菌操作。

参考文献：

Fujii, M., Sato, T. Somatic cell-derived organoids as prototypes of human epithelial tissues and diseases. Nat. Mater. 20, 156–169 (2021). https://doi.org/10.1038/s41563-020-0754-0

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