技术讲解突破mRNA药物生产瓶颈：IIs型限制性内切酶的高效模板线性化策略

在生物医药领域，mRNA 能够通过精准指导细胞合成特定抗原或治疗性蛋白，在肿瘤治疗、罕见病干预等多个方向展现出巨大的应用潜力，已成为当前药物与疫苗研发的核心方向之一。在实际生产 mRNA 药物的过程中，通常以质粒作为 DNA 模板，通过体外转录合成目标 mRNA。然而，环状质粒的结构特性容易导致转录产生的 RNA 产物长度不均一，直接影响药物的质量与稳定性。针对这一关键问题，限制性内切酶能够发挥精准切割作用，将环状质粒线性化，转化为结构一致的DNA模板，从而确保转录出长度均一、结构稳定的 RNA。因此，限制性内切酶不仅是实现 mRNA 药物标准化生产的关键工具，也为推动 mRNA 技术从实验室研究走向产业化应用提供了重要支撑。随着 mRNA 技术的迅速发展，其重要性正日益凸显。

图1. mRNA疫苗的示意图及其抗原表达的机制^[1]

在 mRNA 模板（质粒）线性化过程中，IIs 型限制性内切酶成为首选，核心原因在于其独特的酶切特性能精准匹配 mRNA 生产对模板质量的严苛要求，具体原因如下：

翌圣GMP级别BspQI

BspQI属于Type IIs型内切酶中的一种，可用于mRNA体外合成中质粒线性化，也可用于Golden Gate组装。

产品优势：

1. GMP级别：无抗无动物源发酵、纯化工艺。

2. 高酶切效率：

图2. BspQI酶切效果图：以λDNA为模板，分别投入翌圣及竞品A*的BspQI 0.125 U、0.5 U、2 U、4 U，结果显示翌圣不同投入量的BspQI（Cat#10664ES）均可对λDNA进行有效切割

3. 严格质控：核酸外切酶、切口酶、RNase酶、非特异性核酸酶、支原体检、宿主蛋白残、大肠基因组残留均严格质控。

图3. BspQI切口酶残留检测：相同反应体系中分别加入10U 翌圣及竞品N*的BspQI和0.5 μg质粒DNA，50℃孵育4小时，琼脂糖凝胶电泳检测翌圣BspQI（Cat#10664ES）切口酶残留低于竞品N*

图4. BspQI非特异性核酸酶残留检测：相同反应体系中分别加入10U翌圣及竞品N*的BspQI和1 μg λDNA, 50℃孵育1、16小时，琼脂糖凝胶电泳检测，结果显示翌圣BspQI（Cat#10664ES）无非特异性核酸酶残留

作为中国分子酶领域的领军企业，翌圣生物成功攻克了限制性内切酶研发的 “卡脖子” 难题。针对mRNA研究和Golden Gate组装，我们整理了以下常见IIs型限制性内切酶选择指南，帮助科研人员无缝替换进口酶 —— 无需改变现有实验流程，即可获得一致甚至更优的酶切效果。

常用IIs型限制性内切酶选择指南

除以上常用限制性内切酶产品，翌圣现有超100种限制性内切酶，满足超90%常用需求。戳常用限制性内切酶选择指南（含酶切位点、同裂酶、甲基化）或扫描下方二维码，文件包含：货号、产品名称、酶活、切割位点、buffer兼容活性等信息。

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参考文献：

[1] Maruggi G, Zhang C, Li J, et al. mRNA as a transformative technology for vaccine development to control infectious diseases[J]. Molecular Therapy, 2019, 27(4): 757-772.

[2] Karikó K. Developing mRNA for therapy[J]. The Keio Journal of Medicine, 2022, 71(1): 31-31.