Techniques基于MGISP-960自动化平台的人血液gDNA样本重测序文库构建方法
全基因组重测序是挖掘基因组变异、开展遗传研究的核心技术，传统血液gDNA文库构建多依赖人工操作，存在通量低、重复性差、人为误差大等问题，难以满足大批量样本测序需求。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，优化建立血液gDNA重测序文库构建方法。该方法实现建库全流程自动化操作，有效规避人工操作偏差，提升文库构建效率与均一性，流程稳定可控，可适配大批
全基因组重测序是挖掘基因组变异、开展遗传研究的核心技术，传统血液gDNA文库构建多依赖人工操作，存在通量低、重复性差、人为误差大等问题，难以满足大批量样本测序需求。本文基于MGISP-960高通量自动化样本制备平台，优化建立血液gDNA重测序文库构建方法。该方法实现建库全流程自动化操作，有效规避人工操作偏差，提升文库构建效率与均一性，流程稳定可控，可适配大批量血液样本的标准化重测序建库需求，为高通量基因组测序研究提供可靠技术支撑。
目的：建立适用于人血液gDNA样本的重测序自动化建库流程
平台：MGISP-960（华大智造）
样本类型：人血液gDNA
下游应用：肿瘤易感基因筛查、遗传病诊断、药物基因组学
建库试剂盒：Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
货号：12972ES
文库类型：华大
自动化简版流程
流程分类 | 流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 | ① 加入样本，样本投入量：100 ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择35℃-15min。 |
2 接头连接 | 提前将接头从10 μM稀释到5 μM（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
3 连接产物纯化和分选 | ① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.68×，分选2磁珠比例：0.20x。 |
4 文库扩增 | 将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
5 扩增产物纯化 | 对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
6 建库结束 | 建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（抽检，检测仪器：Qubit 4.0）
序号 | 样本 | Qubit浓度（ng/μL) | 文库体积（μL） | 产量（ng) |
1 | 人血液gDNA-A | 39 | 28 | 1092 |
2 | 人血液gDNA-B | 42.6 | 28 | 1192.8 |
3 | 人血液gDNA-C | 45 | 28 | 1260 |
4 | 人血液gDNA-D | 39.6 | 28 | 1108.8 |
5 | 人血液gDNA-E | 35.8 | 28 | 1002.4 |
6 | 人血液gDNA-F | 29.2 | 28 | 817.6 |
片段大小图（检测方法：琼脂糖凝胶电泳）
结论：文库浓度均在29-45 ng/μL之间，片段大小在350 bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
应用 | 产品货号 | 产品名称 |
RNA建库 | Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 | |
接头 | Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
自动化耗材 | 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） | |
96孔深孔板，U底（1.3 mL) | ||
250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 | ||
荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 | ||
文库浓度测定 | 1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 | |
Qubit专用检测管 | ||
核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） | ||
文库条带大小检测 | GoldBand 100 bp plus DNA Ladder | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | ||
Agarose琼脂糖 | ||
1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |
Not listed yet IMG Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Ki...
Not listed yet IMG 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款）
Not listed yet IMG 96孔深孔板，U底（1.3 mL)
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