Case Studies基于MGISP-960自动化平台的猪肌肉DNA文库构建方法
本研究聚焦猪肌肉样本的高通量DNA文库构建需求，针对传统手工建库操作繁琐、人为误差大、样本通量受限的痛点，依托自动化测序文库建库平台，建立一套适配猪肌肉组织特性的标准化建库方法。该方法依托自动化平台精准的移液控制与磁珠处理技术，完成片段化、接头连接、PCR扩增等全流程操作，无需大量人工干预，大幅降低人力与耗材成本。本研究为猪骨骼肌遗传资源挖掘、产肉性状关键基
本研究聚焦猪肌肉样本的高通量DNA文库构建需求，针对传统手工建库操作繁琐、人为误差大、样本通量受限的痛点，依托自动化测序文库建库平台，建立一套适配猪肌肉组织特性的标准化建库方法。该方法依托自动化平台精准的移液控制与磁珠处理技术，完成片段化、接头连接、PCR扩增等全流程操作，无需大量人工干预，大幅降低人力与耗材成本。本研究为猪骨骼肌遗传资源挖掘、产肉性状关键基因筛选等后续组学研究，提供了高效可靠的文库制备支撑，也为本土猪种分子育种的大规模样本分析提供了技术参考。
建立适用于猪肌肉的全基因组重测序自动化建库流程
MGISP-960（华大智造）
猪肌肉
生猪种业育种、肉制品加工与营养、人类肌肉疾病大动物模型等
Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4
12972ES
自动化简版流程
流程分类 | 流程（其他设置默认按12972说明书内容执行，说明书可依据货号在官网搜索下载） |
1 DNA片段化/末端修复/dA尾添加 | ① 加入样本，样本投入量：200ng （人工）； ② 进行片段化，片段程序选择30℃-15min。 |
2 接头连接 | 提前将接头从10uM稀释1.5倍（人工），加入片段化产物和连接试剂，进行连接程序孵育。 |
3 连接产物纯化和分选 | ① 对连接产物进行纯化，磁珠比例为0.8×； ② 对纯化产物进行片段分选，分选1磁珠比例：0.60×，分选2磁珠比例：0.15x。 |
4 文库扩增 | 将分选产物和扩增试剂混匀，进行扩增程序富余，扩增循环数选择6。 |
5 扩增产物纯化 | 对扩增产物进行纯化，磁珠比例为0.9×。 |
6 建库结束 | 建库结束，弹窗提醒人工取走文库。 |
案例结果展示（检测仪器：Qubit 4.0）
序号 | 物种 | 样本序号 | 文库浓度 （ng/μL） | 文库体积 (μL） | 总文库产量（ng) | 片段大小（bp）（抽检） |
1 | 猪 | 肌肉-1 | 47.48 | 28 | 1330 | 460 |
2 | 猪 | 肌肉-2 | 45.49 | 28 | 1274 | 468 |
3 | 猪 | 肌肉-3 | 43.29 | 28 | 1212 | / |
片段大小图（抽检，检测仪器：Qsep）
结论：文库浓度均在43-47ng/uL之间，片段大小在460bp左右，满足后续上机测序需求。
相关核心产品目录
应用 | 产品货号 | 产品名称 |
RNA建库 | Hieff NGS® OnePot Pro DNA Library Prep Kit V4 一步法DNA酶切建库试剂盒V4 | |
接头 | Hieff NGS® Unique Dual Barcode Primer Kit for MGI®, Set1（板式MGI平台接头，双端唯一短接头，Set1） | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
自动化耗材 | 0.2 mL 96孔PCR板，白色，全裙边（NGS，伯乐款） | |
96孔深孔板，U底（1.3 mL) | ||
250 μL盒装滤芯透明无菌吸头 | ||
荧光定量QPCR压敏封板膜，内附刮板 | ||
文库浓度测定 | 1× dsDNA HS Assay Kit 即用型dsDNA qubit定量试剂 | |
Qubit专用检测管 | ||
核酸定量仪荧光计Qubit（单通道） | ||
文库条带大小检测 | GoldBand 100 bp plus DNA Ladder | |
YeaRed Nucleic Acid Gel Stain (10,000× in Water) YeaRed 核酸染料（10,000× 水溶液） | ||
Agarose琼脂糖 | ||
1x TAE Buffer，TAE 缓冲液(粉末)，PH 8.0，1L |