应用案例MGISP-960 在16S测序中的应用:粪便DNA样本的自动化文库构建流程
01目的建立适用于粪便DNA的16S自动化建库流程02平台MGISP-960(华大智造)03样本类型粪便样本提取的DNA可选择翌圣MolPure® Mag Soil/Stool DNA Kit 磁珠法土壤/粪便DNA提取试剂盒(Cat#18526)。该产品适用于土壤、粪便、水样、水体滤膜、细菌、真菌等环境样本基因组DNA的提取。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲
建立适用于粪便DNA的16S自动化建库流程
MGISP-960(华大智造)
粪便样本提取的DNA
可选择翌圣MolPure® Mag Soil/Stool DNA Kit 磁珠法土壤/粪便DNA提取试剂盒(Cat#18526)。
该产品适用于土壤、粪便、水样、水体滤膜、细菌、真菌等环境样本基因组DNA的提取。采用独特的磁珠和精心优化的缓冲体系,可最大限度的分离纯化样本中的微生物基因组DNA。提取的核酸纯度高,质量稳定可靠,适用于各种下游应用实验,如酶切、PCR、建库等。配合磁珠法自动化提取仪器使用,可实现核酸的高通量提取。
探秘“肠道微生态”:粪便菌群研究与16S rRNA测序的价值
人体肠道内定植着数以万亿计的微生物,构成了复杂的微生态系统,其结构与功能与健康息息相关。粪便作为肠道微生物的主要排泄载体,是研究肠道微生态最便捷、无创的样本来源。目前,16S rRNA测序是解析粪便菌群组成的经典技术——它通过扩增细菌基因组中保守的16S rRNA基因可变区,利用高通量测序快速鉴定样本中微生物的种类与相对丰度,为肠道微生态研究提供了高效工具。
基于16S rRNA测序,我们可以从粪便样本中深入挖掘以下关键信息,从而全面评估肠道健康与研究价值:
全面解析菌群组成与多样性
精准鉴定粪便样本中包含的细菌种类(从门、纲、目、科到属、种水平),并计算α多样性(样本内物种丰富度与均匀度)和β多样性(样本间群落结构差异),从而直观反映肠道微生态的复杂程度与稳定性。
挖掘疾病相关的生物标志物
通过对比健康人群与疾病人群(如结直肠癌、炎症性肠病、肠易激综合征等)的菌群差异,筛选出具有诊断潜力的特异性菌属或菌株。例如,某些致病菌(如具核梭杆菌)的富集或有益菌(如双歧杆菌、罗斯氏菌)的减少,往往与特定疾病的发生发展高度相关。
评估肠道屏障功能与免疫状态
分析菌群结构的变化可以间接反映肠道屏障的完整性。菌群失调往往伴随着肠道通透性增加,导致内毒素等有害物质入血,引发慢性炎症。通过检测,可以评估机体的免疫调节状态及潜在的炎症风险。
预测微生物代谢功能与营养状态
虽然16S测序主要针对物种分类,但结合生物信息学工具(如PICRUSt2),可以基于物种信息预测菌群的功能基因与代谢通路。这有助于了解肠道菌群在短链脂肪酸合成、维生素代谢等方面的能力,为个性化营养干预提供科学依据。
追踪环境粪便污染源
除了人类健康,该技术也广泛应用于环境科学。利用16S rRNA基因序列的宿主特异性,可以精准追踪水体等环境中的粪便污染来源(如区分人类、牛、猪等来源),为环境监测与公共卫生安全提供可靠的技术支持。
指导个性化健康干预与精准用药
基于检测结果,可以为个体量身定制饮食调整(如补充特定益生元)、益生菌补充或生活方式干预方案。同时,分析菌群对药物的代谢能力,有助于预判药物疗效与副作用,推动精准医疗的实现。
16S (V4) Bacterial AmpSeq Prep Kit For MGI /MGI平台16S扩增子建库试剂盒(Cat#12933)
MGI文库
耗材名称 | 品牌 | 货号 | 所需数量 |
250μL盒装滤芯透明无菌吸头 | Yeasen | 83130ES | 6.5盒 |
0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边 | Yeasen | 83560ES | 6块 |
96孔深孔板,U底(1.3 mL) | Yeasen | 83672ES | 6块 |
样本序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
样本类型 | 人粪便 | ||||
投入量 | 10ng | ||||
样本核酸浓度 | 4.3 | 7.92 | 5.56 | 5.42 | 5.48 |
PCR Master Mix | 12.5 | ||||
16s Primer Mix | 2 | ||||
扩增循环数 | 28 | ||||
一轮纯化 | 22.5ul磁珠,25ul无酶水洗脱 | ||||
二轮投入量 | 取3ul一轮纯化产物 | ||||
Hieff Canace Amplification Mix | 12.5ul | ||||
primer | 2ul | ||||
扩增循环数 | 6cc | ||||
二轮纯化 | 22.5磁珠,25ul无酶水洗脱 | ||||
浓度(ng/ul) | 96.2 | 99.8 | 97.4 | 104 | 105 |
文库胶图 | |||||
产品类别 | 产品名称 | 货号 |
核酸提取 | ||
18527ES | ||
16SrRNA建库试剂盒 | 16S(V3-V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina/ Illumina平台16S扩增子建库试剂盒 | |
6S(V3-V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For MGI | 12833ES | |
6S(V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina | 12834ES | |
多重扩增Mix | ||
多重高保真Mix | ||
16S全长扩增 | ||
MGI建库接头 | ||
Illumina建库接头 | Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®Set1/Set2/Set3/Set4(板式) | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
文库定量 | ||
自动化耗材 | 83130ES | |
83560ES | ||
83672ES |