Case StudiesMGISP-960 在16S测序中的应用:土壤DNA样本的自动化文库构建流程
目的:建立适用于土壤DNA的16S自动化建库流程平台:MGISP-960(华大智造)样本类型:土壤样本提取的DNA可选择翌圣MolPure® Pro Soil/ StoolDNA Kit 增强版土壤/粪便 DNA 提取试剂盒(Cat#18527)。该产品适配农田土、林地土、盐碱土、湿地淤泥、果园土、矿山土、栽培基质土、黑土、红土、黄土、沙土等。提取产物可进行
目的:建立适用于土壤DNA的16S自动化建库流程
平台:MGISP-960(华大智造)
样本类型:土壤样本提取的DNA
可选择翌圣MolPure® Pro Soil/ StoolDNA Kit 增强版土壤/粪便 DNA 提取试剂盒(Cat#18527)。
该产品适配农田土、林地土、盐碱土、湿地淤泥、果园土、矿山土、栽培基质土、黑土、红土、黄土、沙土等。提取产物可进行土壤微生物 16S/ITS 高通量测序、宏基因组测序等。
下游应用:
16S 扩增子建库是通过提取样本总 DNA,利用特异性引物靶向扩增 16S rRNA 基因的高变区,并引入测序接头与样本标签,从而构建标准化测序文库的过程。该技术无需依赖微生物体外培养,即可高效、高通量地解析复杂环境中的细菌与古菌群落结构。
土壤 16S 扩增子建库的具体应用
- 土壤微生物多样性与群落结构解析:精准评估不同土壤样本中微生物的丰富度与均匀度(α多样性),以及不同生境间群落结构的差异(β多样性)。通过物种注释,全面揭示土壤中细菌和古菌在界、门、纲、目、科、属等分类阶元上的组成及相对丰度。
- 农业生态与土壤健康评估:研究根际微生物与植物生长的互作机制,评估不同耕作模式、施肥处理(如有机肥、化肥)或连作障碍对土壤微生态的影响。通过识别促生菌或病原菌的丰度变化,为土壤健康诊断与农业可持续发展提供数据支撑。
- 环境修复与污染监测:在重金属污染、石油降解、酸性矿水处理等环境治理场景中,追踪特定功能微生物(如降解菌、耐受菌)的演替规律。分析污染物胁迫下微生物群落的响应机制,评估生物修复效果及生态系统的恢复进程。
- 气候变化与生态响应研究:探究全球变暖、降水模式改变等极端气候事件对土壤微生物群落的影响。通过分析冷偏好型或暖偏好型细菌的丰度变化、微生物生态网络复杂性及碳降解基因响应,揭示土壤微生物在调节土壤碳氮循环和碳库动态中的核心机制。
- 极端与特殊生境微生物探索:针对冰川、火山、荒漠等极端环境下的土壤样本,挖掘适应极端条件的特殊微生物类群。研究这些特殊生境中微生物的生存策略、系统进化关系及其在地球生物化学循环中的潜在功能。
建库试剂盒:16S (V4) Bacterial AmpSeq Prep Kit For MGI /MGI平台16S扩增子建库试剂盒(Cat#12933)
文库类型:MGI文库
自动化耗材和数量:
耗材名称 | 品牌 | 货号 | 所需数量 |
250μL盒装滤芯透明无菌吸头 | Yeasen | 83130ES | 6.5盒 |
0.2mL 96孔PCR板,白色,全裙边 | Yeasen | 83560ES | 6块 |
96孔深孔板,U底(1.3 mL) | Yeasen | 83672ES | 6块 |
实验条件:
样本序号 | 1 | 2 | 3 | 4 | 5 |
样本类型 | 土壤 | ||||
投入量 | 10 ng | ||||
样本核酸浓度 | 33.4 | 107 | 92.2 | 79.6 | 161 |
PCR Master Mix | 12.5 | ||||
16s Primer Mix | 2 | ||||
扩增循环数 | 28 | ||||
一轮纯化 | 22.5 μl磁珠;25 μl无酶水洗脱 | ||||
二轮投入量 | 取3 μl一轮纯化产物 | ||||
Hieff Canace Amplification Mix | 12.5 μl | ||||
primer | 2 μl | ||||
扩增循环数 | 6 cc | ||||
二轮纯化 | 22.5 μl磁珠;25 μl无酶水洗脱 | ||||
浓度(ng/μl) | 90.8 | 102 | 104 | 97.4 | 92.4 |
文库胶图 |
| ||||
翌圣生物产品解决方案:
产品类别 | 产品名称 | 货号 |
核酸提取 | ||
18527ES | ||
16SrRNA建库试剂盒 | 16S(V3-V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina/ Illumina平台16S扩增子建库试剂盒 | |
6S(V3-V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For MGI | ||
6S(V4)Bacterial AmpSeq Prep Kit For Illumina | 12834ES | |
多重扩增Mix | ||
多重高保真Mix | ||
16S全长扩增 | ||
MGI建库接头 | ||
Illumina建库接头 | Hieff NGS® Stubby UDI Primer Kit for Illumina®Set1/Set2/Set3/Set4(板式) | |
纯化磁珠 | Hieff NGS® DNA selection Beads (Superior Ampure XP alternative)DNA纯化分选磁珠 | |
文库定量 | ||
自动化耗材 | 83130ES | |
83560ES | ||
83672ES |
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Not listed yet IMG 250 μL盒装滤芯透明无菌吸头
Not listed yet IMG 0.2 mL 96孔PCR板,白色,全裙边(NGS,伯乐款)
Not listed yet IMG 96孔深孔板,U底(1.3 mL)
Not listed yet IMG Hieff NGS® Fast-Pace DNA Cyclization Kit
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