技术讲解分子诊断明星产品LAMP：从实验室到现场检测全场景覆盖！

LAMP即环介导等温扩增（Loop-Mediated Isothermal Amplification，LAMP），是由日本科学家 Notomi 等人在2000年开发的一项适用于基因诊断的恒温核酸扩增技术，其使用具有链置换特性的DNA聚合酶，通过2-3对基因特异性引物，在等温条件下（通常为 60-65°C）快速扩增靶标序列。与传统的 PCR 技术相比，LAMP 技术具有操作简单、扩增速度快、对设备要求低等优点，特别适合资源有限的现场检测和即时诊断。目前LAMP技术已从实验室逐渐走向检验一线，覆盖包含临床传染病检测、疫情防控、海关检疫、食品与药品安全检测、环境监测等各种领域。

自2000 年首次报道后，LAMP并未像PCR一样被全世界的生物实验室广泛使用，除开其技术专利问题，主要有两方面的原因：其一LAMP的引物设计比较复杂，部分靶标在有限的扩增区域内，很难设计出几组合适的引物，腾挪空间太小。其二，由于其扩增迅速，很容易出现非特异扩增，导致假阳性结果。

1、引物设计，推荐在线引物设计软件http://primerexplorer.jp/e/ ，每个靶标选择2-3套引物在LAMP实验中进行测试筛选，同时，引入环状引物加快反应速度。

2、非特异扩增，推荐翌圣生物最新升级的荧光染料法RT-LAMP试剂（Cat#16729/16730），其采用新一代适配体封闭的Bst Plus DNA Polymerase，搭配精细优化的缓冲体系，实现高效快速和高特异性的扩增，并且可支持室温配置反应体系。

LAMP扩增检测结果主要分为两种方式: 终点法（琼脂糖凝胶电泳法、比浊法、目测法等）和实时荧光法（染料法、探针法等）。荧光染料法RT-LAMP是将荧光染料（如SYBR Green、Syto等）作为荧光标记物，在扩增反应中与双链DNA结合后，荧光信号会增强800-1000倍。使用荧光定量PCR仪在60-65℃恒温条件下进行测试，约30min后即可通过扩增结果判断是否感染病原体，还可搭配微流控芯片或便携式检测仪快速检测。

图1. LAMP扩增流程

1、在多个LAMP和RT-LAMP体系、不同模板浓度下，对比测试翌圣16729、16730和Supplier A的扩增性能，结果显示：在不同体系下，16729/16730的扩增性能与Supplier A无显著差异，且特异性更好。

2、采用真实样本提取的非洲猪瘟样本核酸，以及乙型流感病毒质控品，用数字PCR定量模板浓度后，测试16729/16730的检出情况，检出定义为30min以内起峰，结果显示16729/16730检测灵敏度优异。

3、在多个LAMP、RT-LAMP体系中，同时测试16729/16730反复冻融、热加速后的试剂与-20℃正常保存试剂（T0）的性能，结果显示：16729/16730反复冻融20次、37℃ 放置7天后，阳性检出不受影响，且无非特异扩增，产品稳定性好。