应用案例HiActi细胞因子 | 小鼠气管类器官培养案例

当类器官培养7-9天或中央出现黑色团块时，吸弃旧培养基，加入Cebrary^® Cell recovery solution for Organoid（41421ES）在4℃孵育30分钟以溶解Ceturegel。

离心收集类器官，用基础培养基吹散，再次离心后，将细胞团重悬于新的Ceturegel中，按1:3比例接种到新的培养板中。

选择状态良好的类器官，经Cebrary^® Cell recovery solution for Organoid处理后，用含DMSO（60313ES）的冻存液重悬。

程序降温后置于-80℃过夜，再转入液氮长期保存。

复苏时，将冻存管（84105ES）快速解冻，离心去除冻存液，重新接种培养。

免疫荧光染色鉴定

类器官经固定、破膜、封闭后，加入特异性一抗（如针对上皮细胞、纤毛细胞、基底细胞等标志物）孵育。

结合荧光二抗和DAPI染色后，通过激光共聚焦显微镜观察细胞组成和结构。

炎症模型构建与评估

LPS干预：将培养4天的类器官暴露于不同浓度的LPS（60747ES）中24小时，构建炎症模型。

活死染色：使用钙黄绿素（706161ES）（活细胞）和碘化丙啶（726678ES）（死细胞）对LPS处理后的类器官进行染色，评估细胞活力。

qRT-PCR分析：提取LPS处理后类器官的RNA，通过实时荧光定量PCR（11184ES）检测炎症因子（如IL-1β，IL-6，TNF-α）的mRNA表达水平，评估炎症反应。