应用案例HiActi细胞因子 | 人肠类器官培养案例
肠道是人体重要的消化器官，肠指的是从胃幽门至肛门的消化管，是消化器官中最长管道，人体肠道结构主要包括小肠和大肠。肠道疾病非常常见，如肠梗阻、慢性炎症性肠病、结直肠癌等，其中结直肠癌已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。因此，肠道的研究是现在非常热门的领域，有着广阔的应用前景。01人肠类器官培养步骤人肠类器官的培养重悬隐窝基质胶混合物，孔板中加入一定量的混合物和
肠道是人体重要的消化器官，肠指的是从胃幽门至肛门的消化管，是消化器官中最长管道，人体肠道结构主要包括小肠和大肠。肠道疾病非常常见，如肠梗阻、慢性炎症性肠病、结直肠癌等，其中结直肠癌已成为威胁人类健康最严重的疾病之一。因此，肠道的研究是现在非常热门的领域，有着广阔的应用前景。
人肠类器官培养步骤
人肠类器官的培养
重悬隐窝基质胶混合物，孔板中加入一定量的混合物和隐窝培养基（如24孔板（84013ES）可加入50 μL混合物和500 μL培养基）。
用离心管转移到超净工作台里，PBS（含双抗60162ES）润洗2-3次，将肠粘膜转移至含有EDTA（2 mM）（60163ES）的溶液中，置于4℃，小肠消化约30 min，结肠消化约1h。
将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS（60158ES），摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛（84702ES）过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2:1）重悬沉淀。
将重悬液按一定量接种在预热的孔板中。
每个孔加入一定量的预热的隐窝培养基，37℃培养1-2周。
人肠类器官的传代
可按1：1 - 3：1进行传代培养。
在培养板中，每孔加入一定量的培养基，用枪头将基质胶小心的刮出，取悬液，转移到离心管中。
将要传代的隐窝置于冰上5-10 min。
用枪头吹打基质胶，反复进行，直至基质胶被打碎，中间尽量避免气泡产生。
将消化好的小肠粘膜转移至离心管中，加入PBS，摇晃均匀后用70 μm的细胞过滤筛过滤，1000 rpm室温离心5 min，结肠隐窝无需过滤。
弃上清，加入培养基重悬沉淀，计数，隐窝的数量约10个/μL为佳。
加入一定量的悬液到离心管中，室温离心5 min。
加入预冷的基质胶混合物（基质胶：培养基为2：1）重悬沉淀。
人肠类器官的冻存
将需要冻存的类器官置于冰上5-10 min。
收集类器官，离心后弃上清。
加入冻存培养液重悬类器官，分装至冻存管（84105ES）中，置于-80℃，24h后置于液氮中长期保存。
人肠类器官培养结果
用光学显微镜观察人肠类器官培养情况：
数据来源：Yeasen实验室
结果显示：人肠类器官具有光滑、完整的圆形或近圆形轮廓，边缘清晰，暗色的环状边缘包围着一个明亮的中心腔。
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Recombinant Human Noggin Protein 重组人Noggin蛋白（液体） | 100 ng/mL | |
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Recombinant Human Wnt-3a protein 重组人Wnt3a蛋白（液体） | 100 ng/mL | |
Recombinant Human RSPO1/R-spondin-1 Protein 重组人RSPO1蛋白 | 500 ng/mL | |
其他产品
类别 | 产品名称 | 货号 |
抗体 | Chromogranin A Rabbit mAb | |
Lysozyme Rabbit pAb | ||
基质胶 | Ceturegel® Matrix for Organoid culture，Phenol Red-Free，LDEV-Free基质胶 | |
小分子化合物 | L-Alanyl-L-Glutamine | |
A83-01 | ||
Nicotinamide | ||
Primocin | ||
SB-202190 | ||
CHIR99021 | ||
Y-27632 dihydrochloride | ||
NAC | ||
BP-1-102 | ||
LY294002 | ||
MK-2206 2HCl | ||
Rapamycin | ||
Prostaglandin (PG) E2 |
参考文献：
1. He G-W, Lin L, DeMartino J, Zheng X, Staliarova N, Dayton T, et al. Optimized human intestinal organoid model reveals interleukin-22-dependency of paneth cell formation. Cell Stem Cell 2022; 29(9):1333-1345.e1336.
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类别 | 解决方案 |
类别 | 解决方案 |
培养用细胞因子 | |
类器官培养案例 |
类别 | 解决方案 |
多能干细胞 胚胎干细胞 诱导多能干细胞 | |
专能干细胞 神经干细胞 造血干细胞 间充质干细胞 | IL-3/SCF/FLT3L：赋能HSPC体外高效扩增的核心驱动体系 |
培养用细胞因子 |
类别 | 解决方案 |
先天性免疫细胞 吞噬细胞 树突状细胞 自然杀伤细胞 嗜酸/碱性粒细胞 | 小鼠骨髓来源的树突状细胞（BMDC）培养方法及细胞因子的选择 |
适应性免疫细胞 T细胞 B细胞 |
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