选购指南GST、MBP标签蛋白纯化产品选购指南
蛋白纯化介质

背景描述

蛋白纯化是将目标蛋白从实验样本的总蛋白中分离出来,同时仍保留目的蛋白的生物学活性及化学完整性。在构建载体阶段,除了一些必要的表达元件,还需要考虑密码子优化以及标签的选择。选择合适的标签不但有利于蛋白的纯化,促进蛋白的可溶性,同时也不能影响蛋白的结构功能和下游应用。以下重点介绍GST、MBP标签。
表1 .GST、MBP标签介绍
标签 | 大小(kD) | 功能 | 是否切除 | 标签切割酶 |
GST | 26 | 增强蛋白可溶性,提高蛋白表达量,屏蔽毒性蛋白。仅能纯化可溶性蛋白,如果蛋白不可溶,很难用变性的方法纯化。 | 标签较大,可能会影响蛋白质的功能和下游实验;需根据下游应用考虑是否切除,如果要去除GST融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。 | 3C蛋白酶/PSP |
MBP | 42 | 增强蛋白可溶性(尤其是真核蛋白)和正确折叠,提高蛋白表达量和蛋白稳定性;屏蔽毒性蛋白 | 标签较大,对蛋白的结构/功能会有一定影响,需考虑切除,如果要去除MBP融合部分,可用位点特异性蛋白酶切除。 | Factor Xa、EK |
克隆过程中构建相应的氨基酸识别序列,即可保证后续可通过合适的蛋白酶对GST、MBP融合蛋白标签进行切除。

GST标签蛋白亲和纯化介质

GST标签蛋白亲和层析是利用GST 融合蛋白与固定的谷胱甘肽(GSH)通过硫键共价亲和,通过GSH交换洗脱的原理来进行纯化。该纯化中,凝胶手臂上通过硫键结合一个谷胱甘肽,然后利用谷胱甘肽与谷胱甘肽巯基转移酶(即GST-tag)之间酶和底物的特异性作用力,使得带GST标签的融合蛋白能够与凝胶上的手臂谷胱甘肽结合,从而将带标签的蛋白与其他蛋白分离开。谷胱甘肽通常有氧化型GSSG和还原型 GSH,当我们使用GSH洗脱时,GSH会与凝胶上的谷胱甘肽竞争结合融合蛋白,从而将目标蛋白洗脱。
GSTSep Glutathione Agarose Resin是一种GST标签蛋白纯化树脂,结构上以6%琼脂糖凝胶为基质,通过12个原子的间隔臂,用化学方法共价结合还原型谷胱甘肽制作而成。该设计使树脂的纯化效率得到了较大提高,使其每毫升介质可承载>20 mg GST融合蛋白。本品特异性好,性价比高,可以一步纯化各种表达系统中谷胱甘肽-S-转移酶、谷胱甘肽依赖性蛋白和谷胱甘肽重组衍生物。
表2.翌圣GST纯化产品选购指南
产品货号 | ||||
英文名称 | GSTSep Glutathione Agarose Resin | GSTSep Glutathione Agarose Resin 4FF | GSTSep Glutathione 4FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL | GSTSep Glutathione MagBeads |
中文名称 | 谷胱甘肽琼脂糖树脂(用于GST标签蛋白纯化) | 谷胱甘肽高速纯化树脂(用于GST标签蛋白纯化) | GST标签蛋白纯化预装柱,1 mL/5 mL | GST标签蛋白纯化 磁珠 |
基质 | 交联的6% 琼脂糖凝胶 | 高度交联的4% 琼脂糖凝胶 | 高度交联的4% 琼脂糖凝胶 | 磁性琼脂糖微球 |
耐压 | 0.1 MPa, 1 bar | 0.3 MPa, 3 bar | 0.3 MPa, 3 bar | N/A |
载量 | >20 mg GST 蛋白(40 kDa)/mL基质 | >10 mg GST 蛋白(40 kDa)/mL基质 | 5-10 mg GST标签融合蛋白/mL磁珠 | |
应用 | 载量高、基质的耐压一般,适合孵育法、重力柱小量纯化,推荐实验室规模客户使用 | 载量稍低、基质的耐压性高,搭配蛋白纯化仪可以用于工业大规模蛋白的纯化,更容易放大规模 | 载量最低,通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化 | |
附:GSTSep Glutathione MagBeads(Cat#20562ES)产品特点
1、通过磁性分离方式直接从生物样品中一步纯化出高纯度的目标蛋白,极大地简化纯化工艺和提高纯化效率,适合科研和工业领域便捷地进行GST融合蛋白的纯化。
2、 使用该磁珠进行GST Pull-down实验,由于磁性分离不需要多次离心和较长的孵育时间,与传统的层析法相比,操作更简单、快速和自动化
附:GST-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin)(Cat#20753ES)
GST-Tag Protein purification Kit(Agarose Resin) (GST标签蛋白纯化试剂盒(琼脂糖树脂法)由GSTSep Glutathione Agarose Resin(Cat#20507ES)、优化预制的缓冲液(平衡、洗杂、洗脱缓冲液)、5 mL重力层析空柱(Cat#20522ES)组成,用于高效、快速纯化GST标签蛋白,为GST标签蛋白的纯化带来了极大的便利。

MBP标签蛋白亲和纯化介质

MBPSep Dextrin Agarose Resin是一种纯化带有麦芽糖结合蛋白(MBP)标签蛋白的亲和层析介质,MBP可促进连接蛋白的正确折叠,增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF可以一步纯化MBP融合蛋白,结合的融合蛋白可以用10 mM麦芽糖进行温和洗脱,保护了目的蛋白的活性,MBP融合部分后续可用位点特异性蛋白酶切除。
表3.翌圣MBP纯化产品选购指南
产品货号 | |||
英文名称 | MBPSep Dextrin Agarose Resin 6FF | MBPSep Dextrin 6FF Chromatography Column, 1 mL / 5 mL | MBPSep Dextrin MagAgarose Beads |
中文名称 | MBP标签蛋白高度交联纯化树脂 | MBP标签蛋白纯化预装柱,1 mL/5 mL | MBP标签蛋白纯化磁珠 |
基质 | 高度交联的6%琼脂糖凝胶 | 高度交联的6%琼脂糖凝胶 | 琼脂糖磁珠 |
配体 | 糊精 | 糊精 | 糊精 |
耐压 | 0.3 MPa, 3 bar | 0.3 MPa, 3 bar | N/A |
载量 | >10 mg MBP 蛋白(80 kDa)/mL基质 | >10 mg MBP 蛋白(80 kDa)/mL基质 | >10 mg MBP蛋白(80 kDa)/mL磁珠 |
应用 | 适合孵育法、重力柱小量纯化,推荐实验室规模客户使用。其耐压骨架,也可搭配蛋白纯化仪用于工业大规模蛋白的纯化,更容易放大规模 | 预装柱具有标准接口,可以适配商品化的各类中压色谱系统,如ÄKTA等,方便客户操作 | 通过磁性分离快速便捷地进行蛋白纯化,更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法 |
附:MBPSep Dextrin MagAgarose Beads(Cat#20782ES)产品特点
1、与传统琼脂糖填料的柱层析方法相比,使用磁珠不需要昂贵的层析和离心设备。
2、样品与磁珠的结合以及目的蛋白与磁珠的分离简单、快捷,而且更容易实现高通量、自动化的蛋白纯化方法。适合科研和工业客户高通量地进行MBP标签蛋白的纯化。

测试数据



产品信息


相关产品订购

产品名称 | 货号 | 规格 |
Glutathione,Reduced(GSH) 还原型谷胱甘肽(GSH) | 10 g/100 g/ 1 kg | |
3C Protease | 100 U/500 U/ 500U×2 | |
Bovine Thrombin,High Specific Activity,>2000 IU/mg 牛凝血酶(高活力,>2000 IU/mg) | 1 KU/2 KU | |
UCF.ME® Recombinant Enterokinase (His Tag) 重组肠激酶(His标签) | 100 U/500 U/ 5000 U |
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