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为什么扩增曲线不稳定(扩增曲线平台期锯齿状)?

Q:

为什么扩增曲线不稳定(扩增曲线平台期锯齿状)?

可能原因:
a)RNA 纯度低,体系中存在较多杂质;推荐参数:OD260/OD280=1.8-2.0, OD260/OD230>2.0。随着 qPCR 反应的进行,阻碍反应的因素不断增加,若 RNA 纯度低,杂质多,会进一步影响仪器平台期的算法,导致出现锯齿状。
b)仪器长时间未做校准。仪器未校准会使仪器算法错误,导致各种异常结果。
解决方案:
a)先梯度加大模板稀释倍数看优化效果。若效果仍不好建议新制备高纯度RNA 重新实验。b)定期(一般 1 年)进行仪器校准保养。

qPCR系列 👁 79

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