Q:
阳性对照结果很好,但是目标抗体没有好的富集?
(1)抗体选择:建议选用可靠的ChIP级抗体,避免选择多肽免疫制备的抗体用于CUT&Tag实验。不同转录因子与DNA的结合强度存在差异,部分转录因子可能通过与其他蛋白形成复合物结合于特定DNA片段,必要时可采用甲醛交联以增强结合稳定性。(2)样本处理与优化:弱结合的转录因子易从目标DNA上脱落,且Pol II等转录因子结合的目标DNA片段数量通常远少于组蛋白,导致打断后的DNA量较少,回收效率低。建议适当增加细胞样本量以提高目标片段的捕获效率。