10623ES IVT体系如何优化？

①提高NTP，帽类似物的投入量比例；②添加剂的合理应用；③反应温度可以用到40度。
IVT体系优化可以从模板，T7酶的使用量，如果是共转录加帽可以考虑帽子与NTP之间的比例；酶法加帽的话，在加帽酶，2-O-甲基转移酶以及SAM的用量配比上进行条件优化。关于模板除了线性化要完全这一块，还有一点就是序列设计这一块，例如在5’UTR区注意uAUG以及Kozak序列；CDS需要考虑密码子偏好性，GC3含量，双核苷酸偏好性等；3’UTR：RBP以及miRNA结合位点：还有一个就是RNA的二级结构，5’UTR前序列稳定的二级结构会降低mRNA的表达；3’UTR稳定的二级结构会提高mRNA稳定性，促进mRNA编码蛋白的表达。推荐的IVT体系和更多细节tips，请参考翌圣生物mRNA体外合成实验手册。