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19101ES回收率低,有什么建议吗?

Q:

19101ES回收率低,有什么建议吗?

1)电泳的时候,用新鲜的电泳液,不新鲜的会导致PH值升高,降低DNA和膜的吸附力;
2)切胶的时候在保证目的片段的情况下,尽可能的减少胶体积,并且减少紫外灯下的暴露时间;
3)观察加了溶胶液后混合物的颜色,如果是如溶液颜色为橙色或紫色,需要加入10μL3M醋酸钠(pH值5.2)溶液混合。混合物的颜色变成黄色后进行后续实验;
4)溶胶要完全,可适当延长水浴时间和上下颠倒的次数;
5)加洗脱液前,可适当延长室温晾干时间;
6)70℃预热洗脱液,可提高回收率,加洗脱液时注意加到膜中央,延长室温静置时间。
7) 回收小片段,可以多加溶胶液,溶胶后可以加入0.3 倍体积的异丙醇,可显著提高回收率;另外使用70℃预热的洗脱液也可以提高回收产量。

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