技术讲解重组肠激酶(Enterokinase)助力司美格鲁肽高效制造

为了让糖尿病患者在治疗时有更多的选择，一些新型的治疗糖尿病药物在21世纪初应运而生，如胰高糖素样肽-1(GLP-1)类似物。司美格鲁肽(Semaglutide，又称索马鲁肽)作为GLP-1类似物的代表药物之一，在多个临床试验研究已经证明联合不同的口服降糖药可以有效控制血糖，并能够使患者减轻体重、减少收缩压及改善胰岛β细胞功能，其三种剂型（降糖注射剂Ozempic、口服降糖药Rybelsus和用于减重的注射剂Wegovy）在2023年销售额超过了200亿美元，2024年GLP-1类药物全球销售额突破500亿美元，再次印证了减肥药市场的惊人热度。业内预计司美格鲁肽在未来一段时间内仍会保持强劲的销售态势，吸引不少企业争相布局！

司美格鲁肽的主链结构为一个含有29个氨基酸的中间体多肽Arg34GLP-1(9-37)，经过结构优化（化学修饰），延长了半衰期并提高了稳定性。

图1. 司美格鲁肽的生物制备法路线主要流程示意图

对于化学合成法，司美格鲁肽的生物合成制备法突破了产能瓶颈，更适合大规模连续生产，可进一步降低生产成本，带来更加明显的经济效益增长。肠激酶或Kex2酶搭配羧肽酶B作为司美格鲁肽主肽链（生物制备法）关键酶切原料，酶切效果和价格成本对生产至关重要。翌圣生物致力为广大药企提供稳定的酶原料，在司美格鲁肽生产中可以提供高质量的酶、完善的质控标准品来帮助客户提高产能及批次稳定性、降低成本、快速切入市场。

重组肠激酶（rEK）是高纯度的牛肠激酶轻链亚基，它有着和天然提取的肠激酶同样特异的切割酶活性，切割位点Asp-Asp-Asp-Asp-Lys，可去除位于蛋白N-末端的融合蛋白，以除去不需要的融合标签，是N末端融合通常选择的蛋白酶，在其他残基的不规则切割发生水平较低。

仅需要一种肠激酶进行切割，工艺流程较为直接，操作简便。

肠激酶活性强，切割速度快，适合大规模工业化生产。

活性定义*：不同底物，酶切效率可能不同；一般蛋白越小，切割效率越高，翌圣酶活定义为采用分子量约64.6 KDa的大蛋白，对于寡肽底物一般最大可达到1U切500 μg。

肠激酶酶活测试：

图2. 翌圣肠激酶（20395ES）与竞品N的酶切效果一致

备注：阳性底物（20391ES）是一种通过DDDDK（肠激酶识别切割位点）连接两段特定蛋白序列所构成的融合蛋白，其整体分子量约为64.6 kDa，能够被肠激酶特异性切割成两个独立的蛋白片段，其分子量分别约为27.9 kDa和36.6 kDa。本品作为肠激酶底物，可以用于重组或天然肠激酶的半定量或定性酶活性检测。

肠激酶纯度测试：

图3. 翌圣肠激酶（20395ES）纯度大于95%

备注：肠激酶理论值22.7 kDa，由于毕赤酵母表达后糖基化的影响，SDS-PAGE显示目的蛋白的分子量约40 kDa。一般糖基化修饰后的条带跑胶会存在向上稍微弥散带（如右图），我司也可提供去糖基化酶Endo H（Cat#20414)给客户，供客户去糖基化后跑胶测纯度（如左图）。

肠激酶酶切特异性测试：

图4. 翌圣肠激酶（20395ES）非特异性切割比进口竞品N少

备注：在相同条件下，分别用翌圣肠激酶（20395ES）与进口竞品N的肠激酶进行酶切测试。结果表明：纯化后，翌圣肠激酶（20395ES）产生的非特异性切割杂质明显低于进口竞品N。

肠激酶反复冻融、加速稳定性测试：

图5. 翌圣肠激酶（20395ES）反复冻融、加速稳定测试显示，酶活均为发生明显变化

备注：翌圣肠激酶（20395ES）随机抽取2批次，反复冻融10次、20次，酶活与初始酶活未发生明显变化。25℃储存7、16、32天，37℃储存7、14天，酶活与初始酶活未发生明显变化。

串联工艺具有高产的特点，重组Kex2酶&羧肽酶B常搭配使用于司美格鲁肽药物的串联工艺，两者搭配使用，可实现对目标蛋白或肽段的精准切割，提高酶切效率和产物纯度。

但双酶切工艺复杂度高，受酶活（Kex2酶的最适作用pH为9.0，羧肽酶B的最适pH为7.5-9.0，且两者的酶活还受到其他因素如温度、金属离子等的影响）、成本（重组Kex2酶和羧肽酶B均为重组蛋白，生产成本相对较高，尤其是Kex2酶）影响，放大产能受限。

翌圣重组Kex2酶、羧肽酶B，切割准确、酶活高，且翌圣通过放大生产大幅度降低Kex2酶的成本，使串联工艺不再受成本压力，突破产能瓶颈。

ISO认证超洁净分子酶生产基地-UCF.ME，基地配备工业级AKTA纯化与理化分析设备、百升级高密度发酵机组、万级标准洁净车间和自动化生产线。拥有 5L、10L、30L、100L、500L 和 1,500L 等不同规格的发酵纯化系统，在分子酶产业化领域具备从 5L 到 1,500L 的逐级放大生产能力，可充分满足下游客户在研发、中试与大规模生产等不同阶段的核心酶原料需求。

翌圣拥有强大的研发团队和先进的酶生产基地，通过不断的技术创新和优化，持续提高司美格鲁肽生产关键用酶（重组肠激酶、Kex2酶、羧肽酶B）的质量和产能，提供不同规格和级别的产品，满足客户的不同生产阶段的各种需求。

GLP-1赛道进入“协同增效”阶段

在肥胖治疗领域，胰高糖素样肽-1（GLP-1）靶点的价值已被全球市场验证，但单靶点的瓶颈愈发明显。多靶点药物凭借更优的代谢调控能力和复合疗效，成为研发新主流，以替尔泊肽（GLP-1R/GIPR）、HS-20094（GLP-1/GIP）、玛仕度肽（GCG/GLP-1）等为代表的双靶点药物展现出更优的降糖减重效果，GLP-1类药物研发将加速向多靶点方向发展。

2025年上半年全球减肥药交易中，约半数涉及GLP-1多靶点机制，多笔交易价值总额超20亿美元。

另外，还有异军突起的胰淀素（Amylin）靶点，礼来在ADA年会前夕公布其实验性胰淀素类药物Eloralintide的最新早期试验摘要，12周试验数据显示，体重下降最高可达11.3%，副作用温和，耐受性优于GLP-1，具备成为“更友好型减肥药”的潜力。诺和诺德的CagriSema（司美格鲁肽+cagrilintide）联合疗法，更是将GLP-1与amylin的协同效果推向新高，III期研究实现22.7%的减重率。虽未达到预设目标，但已与替尔泊肽疗效相当，展现了amylin作为协同靶点的巨大价值。

翌圣生物全新推出GLP-1R/GCGR/GIPR稳转细胞系，满足相关药物研发需求，加速药物筛选进程，助力药物临床申报。

稳转细胞系产品清单