应用案例Cebrary类器官冻存液:让您的类器官“冻”住活性,“存”住价值
随着类器官技术在疾病建模、药物筛选和精准医疗中的广泛应用,一个现实问题日益凸显:类器官培养周期长、成本高,且不同来源或不同批次的类器官存在异质性,如何实现长期稳定保存,并在需要时批量复苏,成为研究者普遍面临的挑战。01普通冻存液,为什么“冻不住”类器官?传统的细胞冻存方法,用在类器官上往往效果不佳。原因有三:1. 三维结构的特殊性类器官不是单层细胞,而是具有
随着类器官技术在疾病建模、药物筛选和精准医疗中的广泛应用,一个现实问题日益凸显:类器官培养周期长、成本高,且不同来源或不同批次的类器官存在异质性,如何实现长期稳定保存,并在需要时批量复苏,成为研究者普遍面临的挑战。
传统的细胞冻存方法,用在类器官上往往效果不佳。原因有三:
1. 三维结构的特殊性
类器官不是单层细胞,而是具有空间结构的细胞聚集体。冷冻保护剂需要渗透到核心才能发挥保护作用,而尺寸稍大的类器官,核心区域常常无法被有效保护。
2. 细胞类型的多样性
一个成熟的类器官可能包含多种细胞类型,不同细胞对冷冻的耐受性不同,复苏后容易出现“选择性死亡”。
3. 结构的脆弱性
冰晶的形成会破坏类器官内部的细胞间连接和基质结构,导致复苏后结构松散、功能丧失。
用普通细胞冻存液冻存类器官,结果往往是:复苏后类器官“散了架”,细胞活力低,结构不完整,无法继续培养。
Cebrary®类器官冻存液针对类器官的三维结构特性量身打造。产品采用无血清、无动物源成分的配方,化学成分明确,有效降低外源因子污染风险。配合程序降温盒使用,操作简便、结果可重复。经测试,该产品支持肠、胃、肝、肺、胰腺等多种组织来源的类器官,复苏活率可达80%以上,在液氮中可实现长期稳定保存。

图1. Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液产品示意图
以小鼠小肠类器官为例,冻存1个月、3个月、6个月后复苏,活率分别为88%、85%、82%。复苏后类器官形态完整,接种48小时恢复生长,72小时可见明显增殖,与新鲜培养类器官无明显差异。

图2. 小肠类器官冻存复苏效果
即使使用了专用冻存液,操作不当仍可能导致冻存失败。以下是几个常见问题及建议:
问题 | 表现 | 解决方案 |
类器官尺寸过大 | 直径超过600μm,复苏后核心区域细胞死亡 | 选择早期类器官(400-600μm)冻存,或冻存前适当消化;大尺寸类器官可适当延长冷冻保护剂孵育时间 |
复苏后未及时去除冻存液 | 复苏后细胞活力持续下降 | 复苏后立即用5-10倍体积预热培养基缓慢稀释,轻柔混匀后离心洗涤,重复一次 |
缺少ROCK抑制剂预处理 | 复苏后细胞凋亡率偏高 | 复苏后培养液中添加ROCK抑制剂(如Y27632),可显著提高存活率 |
反复冻融 | 冻存液效果批次间不稳定 | 首次溶解后分装成单次用量,避免反复冻融 |
产品名称 | 产品编号 |
Cebrary®Cell recovery solution for Organoid 类器官回收液 | |
Cebrary®Cell freezing medium for Organoid 类器官冻存液 | |
Cebrary®Tissue Digestion Solution 组织消化液 | |
Cebrary® Tissue Storage Solution 组织保存液 | |
Cebrary® Organoid Rinsing Solution 类器官专用润洗液 | |
Ceturegel® Matrix for Organoid culture,Phenol Red-Free,LDEV-Free Plus 基质胶 |
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