前沿资讯新品|Cas9蛋白，实现精准基因敲除

目前，在基因干扰的方法中，应用最广泛的当属RNAi技术（siRNA or shRNA）了。然而，其较高的脱靶效应和较低的基因下调能力限制了它的应用和发展。因此，CRISPR/Cas9技术则表现出它独特的优势。

CRISPR/Cas9是最新一代基因编辑技术，其工作原理为首先根据靶基因合成sgRNA序列，sgRNA可以和Cas9蛋白结合，因为靶基因和sgRNA序列互补结合，sgRNA可携带着Cas9蛋白精确找到靶基因，并对其进行剪切，产生DNA双链断裂（DSB）。断裂通过非同源端部连接（NHEJ）或同源定向修复（HDR）激活修复。在没有模板的情况下，NHEJ被激活，导致目标基因被删除或缺失，从而破坏目标位点，可用于基因的敲除。在存在与目标位点同源的供体模板的情况下，HDR途径起作用，允许进行精确的修改基因序列，常用于基因的突变修复和基因敲入形成1。

图1.CRISPR/Cas9常见应用

图2.CRISPR/Cas9剪切基因示意图2

表1.RNAi技术和CRISPR/Cas9技术对比表

翌圣生物提供全新一代的多种类型Cas9蛋白，只需要设计目的靶标的sgRNA,将sgRNA和Cas9蛋白通过专用蛋白转染试剂或者电转法导入细胞内部，便可实现体内外精准基因敲除，敲除效率极高，且脱靶效应低。

图3.操作示意图

表2.Cas9产品选择推荐表

图4.产品货号为11362，在20 μL的反应体系，含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为97.37%，远高于90%。

图5.产品货号为11363，在20 μL的反应体系，含有线性化质粒、gRNA 和Cas9的1×Cas9核酸酶反应缓冲液中在37°C下反应1小时，在琼脂糖凝胶电泳测定结果显示，线性化质粒的消化效率为98.28%，远高于90%。

表3.新品Cas9蛋白质控标准

1. Ma Y, Zhang L, Huang X. Genome modification by CRISPR/Cas9. FEBS J. 2014 Dec;281(23):5186-93. doi: 10.1111/febs.13110. Epub 2014 Nov 7. PMID: 25315507.

2. Jiang F, Doudna JA. CRISPR-Cas9 Structures and Mechanisms. Annu Rev Biophys. 2017 May 22;46:505-529. doi: 10.1146/annurev-biophys-062215-010822. Epub 2017 Mar 30. PMID: 28375731.