Applications如何使用潮霉素B筛选稳转株-----潮霉素B的应用
如何使用潮霉素B筛选稳转株-----潮霉素B的应用
潮霉素B的作用原理
潮霉素B（Hygromycin B）是一种氨基糖苷类抗生素，由吸水链霉菌（Streptomyces hygroscopicus）代谢产生，通过破坏易位和促进80S核糖体的错读而抑制蛋白合成，从而杀死原核（如细菌）、真核（如酵母菌，真菌）和高等哺乳动物真核细胞。
目前常用于筛选和维持培养含潮霉素抗性基因的原核或真核细胞。
潮霉素B的应用
● 筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）
大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。
● 由于作用模式的差异，潮霉素B常与遗传霉素G418，博来霉素和杀稻瘟菌素s联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株
它的作用模式与G418 (Cat#60220ES)、博来霉素(Cat#60257ES)和杀稻瘟菌素s (Cat#60218ES)不同，所以非常适合在双选实验中与另一种选择性抗生素联合使用。
● 抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效
● 作为驱虫药加入动物饲料中，饲养动物
● 潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线(kill curve)，即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞50-500 μg/mL；细菌/植物细胞20-200 μg/mL；真菌200-1000 μg/mL。
潮霉素B的实验步骤
● 铺板：细胞培养至80-90%融合时，弃掉培养基，用1-2 mL PBS洗涤细胞两次，加入1mL Trypsin-EDTA溶液，充分洗涤细胞后，加入适量的胰蛋白酶消化液，将培养皿于37ºC放置数分钟使其在镜下大部分变圆即可终止消化，铺板密度约30%左右于5% CO2 37ºC 过夜培养。
● 根据细胞类型，设定合适的浓度梯度。如哺乳动物细胞，可设定50、100、250、500、750、1000 μg/mL。根据储存液的浓度进行对应的稀释操作。
● 维持Hygromycin B 浓度，隔天换液，镜下观察。7 天后，选择能将未转化的细胞完全杀死的最低Hygromycin B 浓度，为稳定转染细胞筛选用的工作浓度。
化学性质
潮霉素B是类白色至微黄褐色粉末，有特殊气味，为弱碱，易溶于水、甲醇、乙醇等，易与许多有机酸和无机酸生成盐。
保存方法
溶液直接存放在2℃～8℃，可存放6个月以上。
注意事项
● 携带hph基因转染的细胞对潮霉素有抗性，转染细胞稳定或暂时表达该基因。
● 潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
产品推荐
翌圣生物的潮霉素B提供两种状态的产品，粉末(1 g/10 g)和溶液(50 mg/mL)，货号分别为60225ES、60224ES。
产品名称 | 产品编号 | 规格 |
60224ES03 | 1 g (20 mL) | |
60224ES10 | 10×1 g (20 mL) | |
| Hygromycin B 潮霉素B | 60225ES03 | 1 g |
| 60225ES10 | 10 g |
客户使用该产品发表的科研文献（不完全统计：部分）
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