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应用方向Anti-Flag亲和纯化凝胶产品升级-flag标签蛋白纯化更高效

📂 产品解读类型 ID 5003

👁 16,731 次浏览 🗓 2026-10-12 源站内容 ID：3269

Anti-Flag亲和纯化凝胶（20584ES）由高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体与4%高度交联的琼脂糖凝胶通过供价偶联制备，本产品具有较高的Flag标签融合蛋白加载容量（至少为1.1 mg protein/mL凝胶），杂蛋白非特异结合少，可用于带有Flag标签的融合蛋白免疫沉淀（IP）和纯化。

来源：翌圣生物｜原文：https://www.yeasen.com/solutiondetail/3269 ↗

产品简介

产品性能

高特异性：选用高质量的鼠源IgG2b单克隆抗体，能够特异性吸附Flag蛋白序列。
高收率，高纯度：得到高纯度的Flag标签蛋白
高结合载量：载量≥1.1mg蛋白/mL凝胶
结合蛋白类型多：Met-FLAG-Protein，N端FLAG-Protein，C端FLAG-Protein
用途广泛：可用于蛋白质纯化或COIP

选择指南

翌圣目前拥有2种Anti-Flag亲和纯化凝胶，各具特色，能够完全满足用户flag标签蛋白纯化的应用需求。

名称	Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel(Anti-Flag亲和纯化凝胶)
货号	20584ES	20585ES
基质	4%高度交联的琼脂糖	4%的琼脂糖
配基	1A3	1.00E+06
蛋白结合	≥1.1 mg蛋白/mL凝胶	≥1.1 mg蛋白/mL凝胶
应用	蛋白纯化,免疫沉淀(IP)	蛋白纯化,免疫沉淀(IP)
选择指南	更适合碱洗脱和酸洗脱	更适合多肽况争洗脱和酸洗

数据展示

1.Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)纯化原核表达的Met修饰的N端Flag融合蛋白，N端Flag融合蛋白，C端Flag融合蛋白。

图1.Yeasen Anti-Flag亲和纯化凝胶纯化结果跑胶图

a：Flag-N b：Flag-M c：Flag-C

M：蛋白Marker;1：发酵菌破碎上清原液；2：发酵菌破碎上清柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱1）；4：洗脱（pH2.7洗脱2）；5：洗脱（pH2.7洗脱3）；6：洗脱（pH2.7洗脱4）；7：纯化后凝胶（pH2.7洗脱）；8：洗脱（pH12洗脱1）；9：洗脱（pH12洗脱2）；10：洗脱（pH12洗脱3）；11：洗脱（pH12洗脱4）；12：纯化后凝胶（pH12洗脱）

2.Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)变性剂兼容性测试，在下表中测试耐受浓度以内对纯化几乎无影响。

试剂	测试耐受浓度	注解
EDTA	5 mM	螯合剂浓度越高，纯化效率越低，目标蛋白回收率越低。
β-巯基乙醇	100 mM	还原剂将破坏填料上抗体中的二硫键。在纯化过程中避免使用还原剂或保持低浓度(<10mM)。当还原剂达到此处提到的最大耐受浓度时，SDS-PAGE分析中将出现抗体重链条带(~50 kDa)。如果样品中含有高浓度的还原试剂，则填料不能重复使用。
DTT	80 mM
Tween 20	5%	洗涤剂的浓度不得超过5%。
Triton X-100	5%	洗涤剂的浓度不得超过5%。
盐酸胍	0.3 M	离液剂将使DYKDDDDK-标记的靶蛋白变性。不超过0.3 M盐酸或1.5 M尿素。
尿素	1.5 M	离液剂将使DYKDDDDK-标记的靶蛋白变性。不超过0.3 M盐酸或1.5 M尿素。
NaCl	0.5 M	浓度越高，纯化效率越低，目标蛋白回收率越低。

3.翌圣Anti-Flag亲和纯化凝胶(20584ES)与国外进口品牌S*纯化对比测试。

图2.Yeasen（a) PK进口品牌S*(b)Anti-Flag凝胶对比测试跑胶图

M：蛋白Marker；1：Flag-N蛋白柱前原液；2：Flag-N蛋白柱后穿透；3：洗脱（pH2.7洗脱）；4：洗脱（pH12洗脱）；5：洗脱（0.1 mg/ml 3×Flag多肽洗脱）；6：洗脱（0.5 mg/ml 3×Flag多肽洗脱）

图3.Yeasen（a) PK进口品牌S*(b)Anti-Flag凝胶每ml凝胶纯化蛋白得率对比测试结果

常见问题

问题	可能原因	推荐解决方案
柱子反压过高	填料被堵塞	清洗树脂。
	填料被堵塞	裂解液中含有微小的固体颗粒，建议上样前最好用0.22μm或0.45μm滤膜过滤，或离心去除。
	样品太粘稠	样品中含高浓度的核酸，延长破碎时间直至粘度降低，或添加DNaseI（终浓度为5μg/ml），Mg2+（终浓度1mM），冰上孵育10-15min
	缓冲液太粘稠	有机试剂或蛋白稳定试剂（如甘油等）可能会引起反压增高，降低操作流速。
洗脱组分中无目的蛋白	Flag标签蛋白变性了	过度的裂解使目的蛋白变性使用温和的裂解条件，实验条件以经验为准。
	洗脱方式不合适	优先选择酸洗或碱洗
	目的蛋白聚集产生沉淀	在细胞裂解前溶液中加入DTT，终浓度为1-10mM
	融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力	测定pGEX中Flag的结合力，对载体进行超声处理，检测其结合力。如果载体中Flag有很高的亲和力，有可能是改变融合蛋白的构象从而降低了Flag标签蛋白的亲和力。
	融合蛋白改变了Flag的构象，影响了目的蛋白的结合力	降低结合温度至4℃，充分清洗。
目的蛋白没有完全洗脱下来	洗脱体积太少	增加洗脱液体积，减小洗脱流速。
	洗脱液中Gly-HCl的pH发生改变	使用新鲜配制的洗脱液
	洗脱液孵育时间不够	增加洗脱液与凝胶的孵育时间
电泳或western blot检测中发现多条带	Flag融合蛋白已经发生降解	在裂解液中加入蛋白酶抑制剂，如加入1 mM PMSF
	Flag融合蛋白已经发生降解	可能是蛋白酶对目的蛋白部分降解造成的，可使用蛋白酶缺陷型宿主菌（如lon-或ompT）
	细胞破碎过度	减少细胞破碎时间，超声前加入溶菌酶（菌液体积的0.1倍10mg/ml溶菌酶，25mM Tris-HCl，pH8.0），避免发泡导致蛋白酶变性，过度超声破碎增加宿主内源蛋白与Flag融合后的蛋白的共纯化。
	抗体与E. coli的各种蛋白反应	抗体吸附E.coli蛋白：Flag-抗体；超声处理去除Flag抗体，可以用于Western Blot检测

订货信息

产品名称	产品编号	规格(mL)
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）	20584ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-DYKDDDDK (Flag) Affinity Gel（Anti-Flag亲和纯化凝胶）	20585ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-HA Affinity Gel（Anti-HA亲和纯化凝胶）	20586ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-Myc Affinity Gel（Anti-Myc标签亲和纯化凝胶）	20587ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-V5 Affinity Gel（Anti-V5标签亲和纯化凝胶）	20588ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-His Affinity Gel（Anti-His标签亲和纯化凝胶）	20589ES03/08/25/60	1/5/25/100
Anti-GFP MagBeads（Anti-GFP免疫磁珠)	20564ES03/08	1/5
Anti-DYKDDDDK (Flag) MagBeads Anti-flag免疫磁珠	20565ES03/08	1/5
Anti-HA MagBeads（Anti-HA免疫磁珠）	20566ES03/08	1/5
Anti-Myc MagBeads（Anti-Myc免疫磁珠）	20567ES03/08	1/5

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来源与原文

来源： 翌圣生物

原文链接： https://www.yeasen.com/solutiondetail/3269

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