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选购指南上新|5分钟快速连接酶预混液，告别16℃过夜！

📂 克隆系列类型 ID 5001

👁 395 次浏览 🗓 2026-10-09 源站内容 ID：2090367325588840448

DNA连接是分子克隆、测序文库构建、DNA损伤修复等分子生物学核心实验的基础操作。T4 DNA连接酶因底物兼容范围广、反应机理成熟，是目前实验室使用最普遍的基础工具酶之一。T4 DNA连接酶是以ATP为能量供体，通过两步腺苷酸转移反应激活底物：先从ATP获取AMP形成酶-AMP中间体，再将AMP传递至DNA的5'-磷酸末端，最终催化DNA 3'-羟基与5'-

来源：翌圣生物｜原文：https://www.yeasen.com/solutiondetail/2090367325588840448 ↗

DNA连接是分子克隆、测序文库构建、DNA损伤修复等分子生物学核心实验的基础操作。T4 DNA连接酶因底物兼容范围广、反应机理成熟，是目前实验室使用最普遍的基础工具酶之一。

T4 DNA连接酶是以ATP为能量供体，通过两步腺苷酸转移反应激活底物：先从ATP获取AMP形成酶-AMP中间体，再将AMP传递至DNA的5'-磷酸末端，最终催化DNA 3'-羟基与5'-磷酸末端缩合形成磷酸二酯键，完成核酸片段的精准拼接。T4 DNA连接酶是重组DNA技术中不可或缺的核心试剂。

图片1.png

图1. T4 DNA连接酶工作原理图

▍为什么传统T4连接要过夜反应？

传统T4 DNA连接酶存在酶活性与末端稳定性的制衡矛盾：升温提升酶活，却易造成黏性末端解离；低温能稳定DNA末端配对，但会显著降低催化效率。

传统方案只能牺牲速度换效率，选用低温（16℃）让末端好好配对，再用长时间反应弥补效率。

翌圣方案则是基于T4 DNA liagse酶学性能的提升与缓冲体系的系统优化，让连接反应在25℃，5min快速完成，不再依赖漫长的低温过夜孵育。

▍翌圣5 min T4 DNA连接酶预混液

Hieff Clone^® Quick T4 Ligation Mix（10930ES）是一款即用型2×快速DNA连接预混液，操作简单方便，25℃，5min 即可完成插入片段与载体的快速连接，同时兼容黏性末端、平滑末端和TA克隆。

1.快速高效

5min快速反应阳性率100%，所见即所得。

图2. 在 25 ℃ 反应 5 min 连接反应条件下， 10930ES 可快速高效连接 100 bp、1 kb、4 kb、5 kb 片段，各片段长度阳性率均为 100%。上排：转化涂板结果；下排：菌落 PCR 鉴定电泳图

2.稳定好

图3. 经过 25 ℃ 放置 28 天和反复冻融40次预处理后， 10930ES 依旧稳定连接600 bp片段，阳性率为 100%。上排：转化涂板结果（左：冻融40次；右：25 ℃，28 天）。下排：菌落PCR鉴定电泳图。

▍产品信息

产品名称	货号	规格
Hieff Clone^® Quick T4 Ligation Mix	10930ES20/60	20T/100T

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来源与原文

来源： 翌圣生物

原文链接： https://www.yeasen.com/solutiondetail/2090367325588840448

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