应用案例血管生成实验案例七：南京大学(细胞给药处理)

实验所用产品

一、实验前准备与基质胶铺板

耗材预冷：实验前，将Ceturegel®基质胶、200 μL枪头盒、EP管、24孔板提前放入4℃冰箱解冻/预冷。

全程低温操作：所有涉及基质胶的步骤在冰盒上进行。

铺板与聚合：在冰盒上，向预冷的24孔板每孔中加入 20 μL 基质胶原液，操作时避免产生气泡。使用1 mL枪头轻轻将胶摊匀，随后轻轻晃动孔板使其均匀铺于孔底。

在基质胶区域外围加入一圈PBS，防止凝胶在孵育过程中变干。将铺胶后的24孔板转移至37℃培养箱中，静置 0.5-1小时，使基质胶完全凝固。

二、HUVEC细胞准备与接种

细胞给药处理：根据实验设计，对HUVEC细胞进行相应的药物处理。

细胞收集与重悬：收集不同处理组的内皮细胞。使用含10%胎牛血清的无酚红DMEM培养基重悬细胞，并进行精确计数。

细胞接种：待基质胶完全凝固后，小心吸弃孔内可能存在的液体。向每孔凝胶表面加入 500 μL 细胞悬液，控制每孔细胞数量约为 1.0×10⁵个（即10万细胞/孔）。每组实验条件设置3个复孔，以保证统计学意义。

三、培养、观察与表型记录

孵育：将接种细胞的24孔板置于37℃、5% CO₂ 培养箱中孵育 4-8小时。

观察与拍照：在孵育期间，使用倒置荧光显微镜观察细胞成管情况，并在关键时间点进行拍照记录。

四、实验结果

图1：4h培养情况	图2：6h培养情况

（数据来源：南京大学）

血管生成实验小贴士

细胞状态：推荐使用3-5代细胞，可进行血清饥饿同步化；

基质胶：全程冰上操作，铺胶轻柔均匀；
细胞接种：使用单细胞悬液，并精确计数，轻柔加样；

观察：建议通过预实验确定最佳观察时间点，以捕获网络成熟期。