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News行业新标准！2026 DNA 甲基化样本前处理与检测技术专家共识

📂 肿瘤早筛/伴随诊断 Type ID 5005

👁 299 views 🗓 2026-10-13 Source ID：2100877062855598080

2026年8月，《中华预防医学杂志》正式刊发《DNA甲基化样本处理及检测技术专家共识》（以下简称“共识”）。为什么这份共识分量十足？DNA甲基化已成为肿瘤早筛、诊断、复发监测与疗效评估中应用最广的新型标志物。然而，检测涉及样本采集、前处理、核酸提取、转化、扩增检测与结果报告等多个复杂环节，不同实验室在平台、方法学、质控与解读上差异显著，直接影响结果互认。共识

Source: Yeasen Biotech ｜ Original: https://www.yeasen.com/solutiondetail/2100877062855598080 ↗

2026年8月，《中华预防医学杂志》正式刊发《DNA甲基化样本处理及检测技术专家共识》（以下简称“共识”）。为什么这份共识分量十足？DNA甲基化已成为肿瘤早筛、诊断、复发监测与疗效评估中应用最广的新型标志物。

然而，检测涉及样本采集、前处理、核酸提取、转化、扩增检测与结果报告等多个复杂环节，不同实验室在平台、方法学、质控与解读上差异显著，直接影响结果互认。

共识的发布，相当于为行业提供了一份“标准化操作地图”。

一、共识框架：14条专家意见

共识围绕DNA甲基化检测全流程管理的4个关键问题——样本采集与前处理、核酸提取与转化、甲基化检测、检测报告，最终形成14条推荐意见。证据质量采用GRADE分级（高/中/低/极低），推荐强度分强推荐与弱推荐。

序号	核心推荐意见	证据/ 推荐
意见1	血液标本cfDNA受样本量、类型、采集管、质量、离心影响大；常规采集8~10 mL外周血分离血浆，EDTA抗凝并4 h内离心；溶血/黄疸/脂血为不合格样本；血浆-20℃或-80℃保存。	高 / 强推荐
意见2	建议采集晨尿，避免非尿液成分与微生物污染；采用含EDTA和抑菌剂的保存液储存尿液样本。	高 / 强推荐
意见3	建议采用均质化的粪便上清作为检测样本；采集后立即置于含EDTA和抑菌剂的专用保存液中。	高 / 强推荐
意见4	新鲜组织离体30 min内置预冷DNA稳定保存液或液氮速冻，长期-80℃以下；FFPE选1年内蜡块，病理指导下取肿瘤细胞富集区。	高 / 强推荐
意见5	痰液取晨起深部痰；肺泡灌洗液/胸腹水/脑脊液含血需抗凝；宫颈分泌物用专用采样刷在鳞柱交界区旋转采集。	中 / 强推荐
意见6	进行DNA甲基化检测时，推荐采用基于磁珠法的DNA提取方法；建议以DNA浓度和片段大小分析进行质控。	中 / 强推荐
意见7	DNA转化效果直接影响结果可靠性；推荐使用最成熟、稳定的预处理方法——亚硫酸氢盐转化法（BS）。	高 / 强推荐
意见8	甲基化荧光定量PCR（MethyLight）适合靶基因特定位点/区域检测，成本低、速度快，适合临床实验室。	高 / 强推荐
意见9	MSRE-PCR适用于有合适酶切位点的检测，因依赖对甲基化序列的识别，不推荐用于cfDNA样本。	中 / 弱推荐
意见10	对甲基化水平精确定量或低丰度DNA检测，推荐采用数字PCR（dPCR）法。	中 / 强推荐
意见11	MS-HRM可灵敏检出低甲基化水平基因，适合具备HRM模块的qPCR平台，成本低、速度快。	中 / 弱推荐
意见12	焦磷酸测序是特定位点甲基化比例定量的经典方法，推荐作为临床特定位点检测的参照方法。	中 / 弱推荐
意见13	推荐WGBS、RRBS作为新型甲基化标志物筛选方法；三者（含质谱）成本高、操作复杂，不推荐用于日常临床筛查诊断。	强 / 强推荐
意见14	推动制定全国性行业标准，建立统一质控品与参考方法体系、多中心验证平台，逐步实现流程、临界值与报告的标准化、同质化与互认。	强 / 强推荐

二、核心解读①：样本前处理——“原料”决定“结果”

甲基化标志物的含量在不同病程阶段差异巨大：癌症早期患者体液样本中的甲基化标志物往往处于痕量水平，而亚硫酸氢盐转化步骤本身还会造成DNA降解与片段化。因此共识对样本采集和前处理提出了明确红线：

血液

常规建议采集8~10 mL外周血分离3~4 mL血浆用于cfDNA甲基化检测；优先选血浆（较血清更稳定、核基因组DNA污染风险低）。分离血浆，初始低速离心800~1900xg，10min)用于沉淀血细胞，随后进行高速离心(14000~16000xg，10min)以清除残留细胞碎片并提高cfDNA纯度。

抗凝与离心

EDTA与ACD抗凝更适用于甲基化检测（肝素会剂量依赖性地干扰qPCR）；血浆分离宜在4 h内完成，EDTA采血管临床上最常用，必要时使用cfDNA专用采血管。

不合格样本

溶血、黄疸、脂血样本应判为不合格，需联系临床重新采样。

其他样本

尿液采集晨尿并加EDTA+抑菌剂保存液；粪便取均质化上清并立即入专用保存液；新鲜组织离体30 min内速冻，FFPE选1年内蜡块。

三、核心解读②：核酸提取——共识首推“磁珠法”

意见6：进行DNA甲基化检测时，推荐采用基于磁珠法的DNA提取方法。建议通过DNA浓度和片段大小分析对提取到的DNA进行质量控制。（证据等级：中，强推荐）

磁珠法相比传统柱式法，对痕量、片段化的游离DNA（ctDNA/cfDNA）回收更有利，且易于自动化、适合高通量与临床合规场景——这对肿瘤早筛这类“样本少、靶点低”的应用尤为关键。这也意味着，提取环节的试剂选型，直接决定了下游转化与检测的“天花板”。

四、核心解读③：转化环节——亚硫酸氢盐法仍是“金标准”

意见7：DNA转化效果直接影响检测结果的可靠性……推荐使用目前最为成熟、稳定的预处理方法——亚硫酸氢盐转化法。（证据等级：高，强推荐）

亚硫酸氢盐转化使未甲基化胞嘧啶脱氨基为尿嘧啶（U），而5mC受甲基保护保持不变，从而将“甲基化状态”转化为“碱基序列差异”，为后续特异性扩增奠定基础。尽管BS转化会带来一定DNA降解，但其成熟度与稳定性使其成为当前临床首选；与此同时，酶法转化（TAPS、EM-seq）作为新兴路线，因降解更低、对片段更友好，正在科研与标志物开发中快速崛起。

五、核心解读④：检测方法怎么选——一张表看懂

共识表1系统比较了各类甲基化检测方法的优劣势。结合14条意见，可按“临床常规 vs 科研筛选”两条主线快速选型：

方法	优势	劣势	适用场景
甲基化特异性PCR（MSP）	无需特殊仪器、成本低	半定量；引物设计难；灵敏度/特异度不高	科研初筛、定性验证
甲基化荧光定量PCR（MethyLight）	灵敏度与特异度高	需特殊仪器；探针设计有难度	临床早筛、伴随诊断、中低通量定量
MSRE-PCR	无需BS处理；仪器简单	酶切不完全致假阴性；仅检测酶切位点	特定酶切位点的中低通量检测
数字PCR（dPCR）	绝对定量；灵敏度达单分子级	须结合BS或MSRE；仪器耗材贵	微量/低丰度样本、甲基化绝对定量
MS-HRM	可半定量；无需探针、成本低	受相邻CpG状态影响；对温控精度要求高	大样本快速筛查、初步分型
焦磷酸测序	单碱基分辨率、可定量	仪器耗材贵；不适合全基因组	特定位点/短片段精确定量（参照方法）
WGBS / RRBS	全基因组/富集区单碱基分辨率	成本高、操作复杂、数据量大	新型标志物筛选（不推荐日常临床）
质谱	可多重检测数十个CpG	样本质量要求高；平台与人力成本高	临床多标志物联合检测、队列验证

六、对IVD与科研的意义：全流程标准化时代到来

共识不仅是一份技术规范，更释放了明确信号——DNA甲基化检测正在从“各做各的”走向“统一标准、结果互认”。对IVD企业与科研机构而言，这意味着试剂与解决方案必须满足“全流程、标准化、可追溯”：从样本保存、磁珠法提取、高效转化，到稳定扩增与规范报告，每一个环节的试剂质量都将直接影响最终检测性能与合规能力。

七、翌圣生物甲基化整体解决方案：对齐共识全流程

作为国内生命科学工具与IVD原料领域的高新技术企业，翌圣生物提供从“核酸提取 → 内参添加 → 样本打断 → 甲基化转化 → 甲基化检测”的全链条解决方案，覆盖IVD/LDT临床检测与甲基化标志物研究两大方向，并支持BS转化、TAPS、酶法转化（EM-seq）等多种技术路线，与共识所倡导的标准化流程高度契合。

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产品推荐

1）甲基化转化

产品名称	货号	技术路线/ 备注
Hieff^® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit 超快速柱式法	12228ES	BS转化（柱式）
Hieff^® Mag Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit 超快速磁珠法	12229ES	BS转化（磁珠法，主推）
Hieff^® Superfast DNA Methylation Bisulfite Kit 5 min超快速柱法	12225ES	BS转化（5 min柱法）
Recombinant Ten-Eleven Translocase 2.0（TET2.0, with buffer）	12212ES	酶法转化 TAPS
DNA Enzymatic methyl-Conversion Kit DNA酶法甲基化转化试剂盒	12213ES	酶法转化 EM-seq

2）甲基化片段化、建库与扩增

产品名称	货号	平台/ 应用
Hieff® UltraShear 甲基化片段化酶	12218ES	样本打断，适配自动化
Hieff NGS® Methyl-seq ssDNA Library Prep Kit for Illumina® V2	12221ES	Illumina 单链建库
Hieff NGS® Methyl-seq ssDNA Library Prep Kit for MGI® V2	12226ES	MGI 单链建库
Hieff NGS® dsDNA Methyl Library Prep Kit for Illumina®	12214ES	Illumina 双链建库
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase（单酶）	10145ES	甲基化后PCR扩增
Hieff Canace® Uracil+ High-Fidelity DNA polymerase mix	12928ES	甲基化后PCR扩增（预混）

3）qPCR甲基化检测

产品名称	货号	应用
Universal TaqMan multiplex qPCR master mix（耐抑制）	11211ES	qPCR预混液
BioSensitive MethyProbe qPCR Master Mix	16701ES	甲基化qPCR预混液

4）科研方向修饰酶（RRBS / WGBS / TAB-seq / ACE-seq 等）

产品名称	货号	应用
HpaII（甲基化敏感性限制性内切酶）	15063ES	RRBS / 酶切
MspI	15064ES	RRBS / 酶切
TET酶	14557ES	TAB-seq（氧化5mC→5caC）
BGT酶	14552ES	TAB-seq 偶联
APOBEC酶	14553ES	ACE-seq（单碱基分辨率甲基化测序）

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