Buying Guides干货 | 溶菌酶的生产工艺和使用指南，超详细！

溶菌酶的概念

溶菌酶的作用机制

溶菌酶的来源

溶菌酶的发现过程

溶菌酶的生产工艺

1. 取0.5-2 mL细菌培养液（最多不超过2×109个细胞），10,000 rpm离心2 min，弃上清。
【注】：菌体不宜过量，过量会严重降低产量。起始处理量与细菌密度、种类等相关。
2.先配制溶菌酶缓冲液：20 mM Tris, pH 8.0; 2 mM Na2-EDTA; 1.2% Triton X-100，然后取一定量溶菌酶干粉加入溶菌酶缓冲液中，至终浓度为20 mg/mL。
3.针对细菌尤其是革兰氏阳性菌，加入180 μL 20 mg/mL Lysozyme振荡重悬，37℃水浴或金属浴30 min以上。
3. 加入20 μL Proteinase K (20 mg/mL)，振荡混匀。
4. 若残留RNA对后续实验有影响，可加入5 μL RNase A (100 mg/mL)溶液，振荡混匀，室温放置5-10 min。
5. 加入200 μL结合液BD，立刻振荡混匀，70℃水浴或金属浴10 min。

DNA提取：

1. 将DNA吸附柱进行柱平衡。

2. 加入100 μL异丙醇至上述冷却后的样本预处理混合液中，立即振荡混匀，短暂离心收集管盖内的液体。

3. 将上述混合物加入DNA吸附柱中，12,000 rpm离心1 min，弃掉废液。

4. 加入500 μL去蛋白液，12,000 rpm离心30 sec，弃掉废液。

5. 漂洗2次。

6. 在DNA吸附柱中央加入30-100 µL洗脱液，离心，回收DNA溶液。

1.先配制溶菌酶缓冲液：20 mM Tris, pH 8.0; 2 mM Na2-EDTA; 1.2% Triton X-100，然后取一定量溶菌酶干粉加入溶菌酶缓冲液中，至终浓度为1 mg/mL。
2. 针对革兰氏阴性菌：加入 100 μL 1 mg/mL 溶菌酶工作液。涡旋振荡 10 sec，室温孵育 2 min。重复振荡孵育 3 次。
针对革兰氏阳性菌：加入 100 μL 1 mg/mL 溶菌酶工作液。涡旋振荡 10 sec，室温孵育 2 min。重复振荡孵育 6 次。
【注】细菌数多于 5×10⁸ 细胞时，溶菌酶工作液加入量为 200 μL。
3. 短暂离心收集细胞，弃上清。
4. 涡旋振荡重悬分散细胞。加入 500 μL 裂解液，反复吹打混匀，并剧烈涡旋振荡至无明显不溶物。

RNA 提取：

1. 加入上述裂解物至 DNA 清除柱中，12,000 rpm 离心 1 min，保留滤过液。

2. 加入 0.5 倍体积无水乙醇，立即吹打混匀。

3. 将上述混合物加入 RNA 吸附柱中，12,000 rpm 离心 1 min，弃掉废液。

4. 加入500 μL去蛋白液，12,000 rpm离心30 sec，弃掉废液。

5. 漂洗2次。

6. 在RNA吸附柱中央加入30-50 µL无酶水，离心，回收RNA溶液。

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