小鼠TNF-α ELISA试剂盒测血清样本需要稀释多少倍？

测血清我一般不建议直接套固定稀释倍数。先选2-3只代表动物血清，用试剂盒自带稀释液做1:2、1:5、1:10三个梯度，如果OD落在标曲中段，就用那个稀释度；如果1:2都超出标曲，就继续做1:20。脾细胞上清如果刺激过，TNF-α可能很高，可以先1:5或1:10测；未刺激常常不用稀释。预实验一定要做，尤其你只有20个样本，别全部一次测完浪费。

预算1500以内且要货期短，我常用几个国产厂家：欣博盛、联科生物、四正柏、Elabscience，48T基本能满足20个样本加标曲和复孔。下单前确认有现货，不要只看详情页，直接问客服发货时间；一般现货2-4天能到。还要问盒子里是否含血清/血浆配套稀释液，有些品牌稀释液要单买或通用款，不适合血清会增大CV。

灵敏度要pg级别，选标曲最低点最好≤7.8 pg/mL或至少15 pg/mL以下，并看说明书给出样本类型是否明确写着血清、血浆、培养上清。到货后用标准品做一条标曲，再加一个已知浓度血清复孔验证CV，别按说明书直接上珍贵样本。质量稳定方面可要求商家提供该批次质检报告，重点看批间CV和最低定量限。

预实验不仅摸稀释倍数，还要看稀释线性。你可以把1个高值血清倍比稀释，回算浓度是否一致；如果稀释后回算明显升高，提示有基质抑制或干扰，要增加稀释或换样本稀释液。血清样本还应注意不要用溶血样本，血红蛋白会影响显色。脾细胞上清建议离心后取上清，避免细胞碎片堵孔。