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Can BSA standards still be used for protein quantification after repeated freeze-thaw cycles?
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Tags：#Bovine serum albumin #BCA quantification #Repeated freeze-thaw #Reference standard #Protein quantification
All Answers4
陈
陈杰
2026-09-11
要判断是不是冻融导致，可以取冻融过的标准品和新分装的标准品同时做BCA标曲。如果新标曲R²能回到0.995以上，旧标曲明显偏差，就说明该丢弃。冻融四五次后BSA可能出现肉眼不易见的絮状或管壁吸附，也可以测一下280 nm吸光值看是否下降。以后分装20-50 μL/管，视你一次标曲用量而定；不要整瓶反复冻融，也不要放在4℃超过一周，低浓度蛋白溶液稳定性本来就一般。
A
Antibody4125
2026-09-04
反复冻融对2 mg/mL BSA标准品影响不小，尤其PBS体系下冷冻时形成冰晶和盐浓度升高，容易让部分BSA聚集，BCA标曲变散、R²下降很常见。建议分装成单次用量，你如果用96孔板做标曲，每孔20 μL、做复孔和系列稀释，一次可能只需几十微升，分装50-100 μL/管比较合适。-20℃短期保存，-80℃更稳，取一管用完即弃，避免反复冻融。若标曲连续不好，首先重配或换新分装标准品。
杨
杨佳
2026-09-11
除了冻融，PBS配制的标准品反复开盖取用还可能被细菌污染，导致蛋白降解。分装前建议用0.22 μm滤器过滤除菌，操作在超净台里完成。不要随手加叠氮钠等防腐剂，有些防腐剂会干扰BCA反应，加之前最好验证。你现在标曲点散、R²约0.98，如果排除了稀释和加样误差，基本可以怀疑旧标准品状态。动物房取血清样本定量时，建议用新配标准品与样本同板检测，不要把旧标曲继续用于新的关键实验。
B
BufferPlus
2026-07-21
动物房取血清样本共用这条标曲，不建议依赖冻融多次的旧标准品。血清样本基质复杂，血红蛋白、脂类、还原性物质都可能干扰BCA，标准品稳定性不好会放大误差。建议重新配一批BSA标准品，分装后与血清样本同时稀释、同板检测。血清样本本身也要分装，避免反复冻融，取样时记录冻融次数。若样本量少，可先做预实验确定合适稀释倍数，减少复孔差异。R²只有0.98时，定量结果供趋势参考还可以，但用于动物实验分组要谨慎。
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