猪场做伪狂犬PCR检测，Taq酶选普通的还是热启动的？

关于-20保存和反复冻融，你完全能处理。Taq酶一般含50%甘油，-20可以稳定保存，怕的是一次买太大反复化。建议买500U或1000U后按每管10-20μL分装，单次反应用量固定，以后只取一管，避免整瓶反复冻融。分装时用无菌PCR小管，动作快，放在冰盒上。如果能配一支稀释/保存液，按1:1稀释后分装也会更稳。别把酶放在无霜冰箱靠近除霜加热区，放深处固定位置。

换酶只是其中一步，伪狂犬检测弱条带还要先看DNA提取。血液样本抗凝剂、淋巴结匀浆是否充分、洗脱体积都会影响模板量。建议每批提取带一个已知弱阳性质控和一个阴性空白，跑胶时加定量Marker。如果换热启动Taq后弱阳仍不稳定，优先优化退火温度（做55/58/60℃梯度）和循环数，别盲目加模板或酶量。你的体系一次50个反应，建议固定dNTP和引物批次，避免新旧混用造成批间差异。

价格和现货我不给你编具体数，500U和1000U不同品牌、国产/进口差别不小。询价时别只问单价，要问清楚：1）酶活力定义是U/μL还是总U；2）是否含10×缓冲液和MgCl2；3）是否冷链发货、到货时冰袋状态；4）当地是否有库存现货。一般找做诊断原料或兽医检测试剂的代理商，1000U折算下来比500U便宜，但要结合你每月实际用量，避免过期浪费。现货情况直接让供应商查批次效期。

猪场这种血液和淋巴结提DNA做伪狂犬普通PCR，我建议优先选热启动型。你之前用普通Taq偶尔条带弱，不一定是酶活性问题，但热启动能减少加样阶段低温下的引物二聚体和非特异消耗，对低丰度模板更友好。50个反应量不大，买1000U会用到分装，500U也可以。重点看酶缓冲液是否已配Mg2+，以及是否含甘油可在-20保存。换酶后先拿几个阳性、弱阳和阴性样本做平行比对，确认条带一致再批量用。