Question Detail
The intestinal tissue collected from the chicken farm is very turbid when lysed with Trizol reagent, and the RNA yield is low. What should I do?
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How to Answer This Question
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1
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All Answers4
小
小小新手6851
2026-08-04
肠道组织建议取材前尽量清除内容物。杀鸡后取肠段，用预冷无RNA酶的PBS或生理盐水快速冲肠腔，外表面再用玻片轻刮掉粘液，吸水纸吸干后剪碎入Trizol。不要反复冻融。粘液蛋白多，可以先加1mL Trizol匀浆后再补0.5mL，控制在1.5mL/50-80mg组织左右；裂解液过多反而氯仿分层变差。匀浆用中等转速、短时冰浴。
T
Tom3509
2026-07-04
中间层厚是肠道组织蛋白、多糖和脂肪混合造成的。离心后取上清别追求多，留1-2mm避免碰到中间层；如果上清仍浑浊，可以转移到新管，加等体积氯仿再涡旋离心一次。RNA得率低有时是取上清太保守，大量水相被丢弃，或者异丙醇沉淀后洗涤时把沉淀吸掉。可以加糖原助沉，并在-20℃延长沉淀到30-60min。
质
质控小哥
2026-07-02
肠道组织RNA降解快，两三百ng/mg在十二指肠和空肠不算很高，但要看RIN或电泳。如果现场来不及，最好取材后立刻液氮速冻或放RNAlater，统一提取。Trizol裂解后浑浊并不代表失败，很多肠道样本都这样。若比值不稳，建议后续联合柱式纯化：Trizol氯仿分相后取上清，加70%乙醇上RNA结合柱洗脱，能去除粘液多糖和蛋白。
R
Research4593
2026-09-22
Trizol和柱式联用对肠道样本会更稳定，尤其下游做菌群测序或转录组。可以先试用国产柱式RNA试剂盒做预实验，比较得率、260/230和RIN。国产裂解液也可以用，但肠道样本对裂解液去蛋白能力要求高，建议找供应商要试用装，不要直接大批量采购。如果只用Trizol，建议增加一次氯仿抽提、75%乙醇洗两次，比值会稳一些。
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