小鼠胚胎培养液里加DTT需要过滤吗？浓度多少合适？

粉剂溶解后建议过滤。DTT 粉剂即使标注高纯，也可能有颗粒、微生物污染或内毒素，胚胎培养体系比较敏感。用 0.22 μm 低蛋白结合滤膜过滤母液，分装成小体积 -20°C 保存，避免反复冻融。KSOM 本身最好也过滤或已商品化无菌，加入 DTT 后不能再高压，通常用滤器处理。过滤前确认滤膜材质对 DTT 无吸附，可用低吸附 PES 膜。

含 DTT 的 KSOM 我不建议长期存放。DTT 在水溶液中易氧化，4°C 放几天还原能力会下降，可能影响批次间稳定性。我一般现配现用，或配成母液分装 -20°C，临用前解冻一支加入 KSOM。如果要配一批，分装后 -80°C 保存，使用前 37°C 平衡 pH 和渗透压，并在培养箱平衡气体后再加胚胎。

小鼠胚胎对杂质、渗透压和氧化还原环境都很敏感，除了过滤，建议选择细胞培养级或胚胎培养级 DTT，关注纯度、内毒素和重金属。配制完成后测 pH 和渗透压，尽量与对照 KSOM 一致。正式实验前用少量胚胎做预实验，观察从受精卵到囊胚的发育率，并记录不同批次 DTT 的批号。不要用工业级粉剂直接入培养液。

文献里 KSOM 添加 DTT 的浓度我见过多为 0.01–0.1 mM（10–100 μM），不是 1 mM 级别，尤其小鼠胚胎对还原剂敏感。建议你用自己实验室的 KSOM 和胚胎先做梯度：0、10、25、50、100 μM，比较卵裂率和囊胚率。高浓度可能反而抑制发育，别直接照搬高值。粉剂可先配成 100 mM 母液，再按体积稀释到工作浓度，避免多次称量。