SDS裂解小鼠肝脏组织时总起沫，影响后续蛋白定量怎么办

超声本身就是起泡源头。小鼠肝很软，不一定依赖超声，我一般用电动组织研磨器或玻璃匀浆器在冰上匀浆约30秒，加裂解液后基本不起泡。如果没有设备，可以液氮研磨后加裂解液重悬也干净。超声后若泡沫不散，可把管放4度松盖过夜，第二天泡沫会塌下去，再离心取上清。定量时建议用同样裂解液背景做标准曲线，否则SDS会影响BCA或Bradford的读值。

肝脏质地软，RIPA里1% SDS对常规总蛋白提取其实偏高，降到0.5%或0.25%往往够用，尤其后续要做BCA，SDS浓度太高反而会干扰显色或产生沉淀。我用0.5% SDS加1% NP-40加0.5%脱氧胆酸钠的配方提肝组织，匀浆后泡沫少很多，膜蛋白回收也不错。如果必须保持终浓度1%，可以先在不含SDS的裂解液里匀浆，超声结束后再补加SDS母液，能明显减少起泡。

我做过小鼠肝，50mg组织不算大，但1% SDS加超声很容易起泡。先别急着降SDS，把样品管始终插冰里，超声探头伸到液面下再启动，用脉冲模式，功率别拉满，每次不超过5到10秒，间歇时轻弹管壁。超声后4度放几分钟，然后12000g离心5分钟，泡沫会浮在表层，用细长枪头贴着管壁伸到液面下吸中间清液。加样前不要反复吹打，否则气泡更多。

可以在泡沫表面加几微升无水乙醇或正丁醇帮助消泡，但我不太建议往蛋白样品里加，可能干扰后续实验。更实用的是先离心，泡沫会形成一层，用胰岛素针或细枪头从泡沫下方慢慢抽取。若用BCA，SDS浓度高会造成显色偏移，可把上清适当稀释后再测，或用试剂盒里带SDS兼容的标准品。实在不行把SDS降到0.2%并延长裂解时间，对小鼠肝脏总蛋白提取通常是够的。