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全部回答5
N
NinaCell3081
2026-09-09
原代神经元很怕“看着没事但突触和电生理已经受损”。除了转染后24 h/48 h看细胞形态，建议做LDH释放或PI染色评估毒性。效率可以用低剂量GFP质粒先测，比如0.2 μg/24孔，看GFP阳性比例和轴突形态。转染时间越短越好，有些试剂要求2-4小时，有些可做反向转染。转染后不要频繁换液，保持温度稳定。如果效率低但毒性小，可以降低质粒量或分批转染。
F
Flask
2026-09-03
原代神经元非常难化学转染，建议先考虑病毒载体过表达。我们做原代皮层神经元过表达，化学转染效率一般只有5-20%，而且毒性大。用AAV9或慢病毒，尤其是AAV9在DIV7-14感染，神经元存活好、表达稳定。如果实验只能用质粒，建议用电转或核转，比如Lonza的Nucleofector有原代神经元程序，24孔板8孔可以合并做小体积电转，质粒用量能降到0.5-1 μg。
A
Assay
2026-09-23
质粒质量和内毒素对原代细胞影响巨大。同样试剂，质粒提取方法不同毒性差很多。建议用无内毒素大提试剂盒，最后测内毒素低于0.1 EU/μg，A260/A280在1.80-1.90。如果质粒浓度低或含有乙醇，也会导致神经元死亡。启动子建议用CAG或CMV，但CMV在部分原代神经元可能随时间衰减，CAG更稳定。这些基础条件不解决，换试剂可能看不到差异。
O
OscarLab
2026-09-22
原代实验样品量小，建议直接找厂家申请试用装，一般0.1-0.5 mL足够你做条件优化。问清楚是否提供原代神经元或原代细胞的数据或参考文献，没有的话谨慎。货期国产现货通常一周内，进口的神经元专用试剂可能2-3周。价格比普通转染试剂贵，但24孔板每次用量少，单孔成本可接受。建议同时买1-2个不同机理的试剂平行试，不要一次性囤大包装。
B
Buffer
2026-08-27
如果坚持化学转染，选神经元专用低毒配方。一些国产试剂有神经元转染小包装，可申请试用。重点关注试剂是否兼容Neurobasal/B27体系，因为原代神经元不能轻易换普通DMEM。转染时细胞密度50-70%、质粒用量0.5 μg/24孔、试剂/DNA比从1:2左右开始摸。转染后按说明书窗口30-90分钟换回原条件培养基，能减少毒性。转染当天不要加抗生素。
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