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全部回答5
T
TubeTech1775
2026-09-08
带UNG的探针法试剂盒可选国产主流品牌，但我建议选针对低模板优化、含dUTP/UNG的探针法预混液，不要选太廉价的基础版。2μl RNA样本量不大，加样前先配好预混液再分装，避免反复吸打。灵敏度要自己验证：用低拷贝质粒或稀释阳性cDNA做10倍梯度，看Ct SD和线性。到货后注意UNG在50°C预处理时不要延长太久，否则会损伤含U产物信号。
抗
抗体控
2026-08-27
DNase处理确实可能损失RNA，但如果不处理gDNA，定量和NTC都受影响。2μl RNA样品量小时，建议用柱上DNase处理，洗脱前在柱上消化10-15分钟，比溶液中处理损失小。处理后测浓度会受碎片和盐影响，不要光看浓度，可做NRT确认gDNA去除。操作上别用过量DNase，不要延长消化时间，处理完可热灭活并短暂离心。
K
Kevin2921
2026-09-09
先把两件事分开：UNG防的是气溶胶扩增产物污染，不是gDNA污染。你NTC起峰要先跑熔解曲线或电泳，如果和阳性产物一致可能是气溶胶，UNG有帮助；如果片段大小符合gDNA扩增，必须用DNase或跨内含子引物。全血RNA提取后建议做NRT（无逆转录对照），NRT起峰就是gDNA残留，否则更可能是产物污染或引物二聚体。
V
ViviReagent
2026-09-24
操作坑：全血RNA提取时，如果用的是柱式试剂盒，建议在洗脱前做DNase I柱上消化，避免单独一步再纯化造成RNA损失。2μl RNA上样时用低吸附吸头，加样后可轻弹混匀不要剧烈涡旋。带UNG试剂在加样后不要室温放置太久，按说明尽快上机，否则UNG可能提前消化含dUTP的后续产物。NTC偶尔起峰也要检查引物探针是否形成二聚体或非特异。
W
Wendy3463
2026-09-01
选型看三个点：是否含dUTP/UNG、是否适合2μl模板、是否做过敏捷性测试。到货后先跑NTC和NRT各4-6个重复，NTC起峰情况应明显减少，但如果gDNA还在，必须回头优化DNase步骤。分区操作仍然是底线，加样区和扩增区分开，常备核酸清除剂。具体品牌不点名，但可以找“探针法qPCR预混液，含UNG”规格，要求供应商提供血液RNA低模板的验证数据。
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