培养HepG2和RAW264.7用DMEM高糖还是1640？需要补谷氨酰胺吗？

实验室用量不大时，我建议统一买含稳定谷氨酰胺的高糖DMEM，HepG2和RAW264.7都能用，库存简单。丙酮酸钠对这两种细胞不是必须，如果培养基不含且你们做高密度或长时间培养，可以按1mM加，但不要盲目。新批次到货先分装并做小规模测试：接种两种细胞各一瓶，观察72h贴壁形态和倍增，记录pH变化。开封超过4周的基础培养基不必纠结，直接换新。备一小瓶GlutaMAX 100×，4℃保存，按需补加即可。

1640开盖一个月pH偏碱，首先查瓶盖是否密封、冰箱是否温度波动大。建议新培养基到货后直接分装到50ml离心管，每管够用2-3次，减少顶部空气。正常新鲜1640/DMEM颜色橙红到桃红，偏粉紫说明过碱，偏黄说明过酸。轻微偏碱可在超净台松盖放回5%CO2培养箱平衡一会再使用，但不建议反复调酸碱。如果颜色明显异常或已经有浑浊，别赌，直接弃掉。

商业即用型里的L-谷氨酰胺在4℃会缓慢降解，一般开封后3-4周开始明显下降，所以1640开一个月后细胞状态变差可能与此有关。现在很多基础培养基用GlutaMAX或丙氨酰谷氨酰胺替代，稳定性好很多，37℃下也不易产生氨。如果买的是普通L-谷氨酰胺版本，开封超过3-4周，建议补加GlutaMAX到2mM左右，或按原配方补加，但不要重复加。补加后可用0.22μm过滤再分装，减少污染。

HepG2我习惯用高糖DMEM（4.5g/L葡萄糖）加10%FBS，生长和形态都比较稳；RAW264.7用高糖DMEM也完全能养，部分实验室用RPMI1640也可以，但1640缓冲体系和营养侧重不同，开盖后如果保存不当确实容易偏碱。你们如果想把两种细胞统一，可以直接都用高糖DMEM，减少库存和交叉风险。换液频率根据密度来，RAW264.7密度上来后产酸较快，注意观察颜色。别频繁在DMEM和1640之间切换，细胞需要适应。