AAV包装用转染试剂，三质粒系统在HEK293T里转染效率怎么提高？

我用PEIpro做AAV9，T75瓶细胞密度80%偏满，建议降到70%左右转染。质粒总量按T75 25μg，三质粒质量比1:1:2（pAAV-pHelper-RepCap），试剂与DNA体积比约3:1。转染当天提前换Opti-MEM，复合物15min后缓慢滴入。滴度低也可加10mM丁酸钠或氯喹，48h收细胞和上清分别测。供应商如果要求技术支持，建议选华南地区有代理的品牌如Polyplus、翌圣，便于让他们提供批次报告和AAV案例方案，不要只问现货。

滴度上不去不一定是试剂问题，常见是转染时培养基含血清/抗生素太高。我们用TransIT-VirusGEN包装AAV9，T75总DNA 25μg，试剂60μL，转染后18-24h补液，72h收样。增强剂可试氯喹（终浓度25μM）或咖啡因，但要留意细胞毒性，先做一次。华南技术支持较好的是Polyplus代理商或达科为，他们能按质粒总量和容器给优化表，且广州一般有现货。试剂预算内可考虑国产替代，但问清是否对AAV三个质粒有验证。

三质粒AAV滴度低首先查DNA总量。T75 80%密度，我通常总DNA用25-30μg（等摩尔比pAAV:pHelper:pRepCap约1:1:1），PEI MAX 40k按质量比3:1（PEI:DNA），而不是简单按体积1:3。转染前1h换成无血清DMEM，复合物形成15min，加入后6h换完全培养基。试剂可试Polyplus PEIpro或国产翌圣PEI。华南现货找广州达科为或本地代理，问清楚货期。

细胞密度和质粒比例影响很大，我们优化后滴度提高了两倍多。

建议试试PEIpro，比脂质体便宜，但要注意pH和混匀方式。