用重组人细胞因子刺激PBMC，如何分装保存才不降解？

载体蛋白很重要。常规科研级重组因子溶解后如果没有载体蛋白，低浓度下很容易吸附管壁并降解。我一般用含0.1% BSA或10% FBS的缓冲液稀释，但如果PBMC实验对血清批次敏感，最好用无动物成分的稀释液或重组白蛋白。采购时可以选animal-free级别，内毒素尽量低，比如<0.1 EU/μg，尤其做T细胞分化，内毒素高会干扰极化。科研级足够做常规PBMC刺激，但同一比较实验尽量用同一批号，避免批间活性波动。

采购层面建议不要只看品牌，要拿到COA，确认ED50、内毒素、纯度和推荐溶解缓冲液。大厂像PeproTech、BioLegend、R&D的科研级因子通常有明确活性数据，开瓶后储存条件也写得很清楚。分装时记录批号和分装日期，同一批实验用同一分装批。若担心活性，可做短期稳定性：分装后第1周、第4周各测一次ED50，与自己实验剂量比较。临床前研究且下游可能涉及回输，再考虑无动物成分或GMP级；常规刺激用科研级即可。

先把保存条件改到-80℃，-20℃对低浓度重组因子往往不够，尤其IL-12和IFN-γ容易失活。溶解时按COA推荐的溶剂，一般用含0.1% BSA或5%海藻糖的PBS/Tris缓冲液，不要用纯水配成低浓度后直接冻。分装成单次使用量，比如10-20 μL/管，用低吸附管，避免反复冻融。用多少取多少，剩余不要再次冻融。分装后-80℃通常建议1-3个月内用完，不要放半年以上。每批开封前最好做一个已知细胞系或PBMC的剂量反应，确认活性没掉。

重组因子一定要加载体蛋白再分装，裸液放-80也会失活很快。

分装体积看实验用量，10-20微升一管，用一次扔一管最保险。